[發明專利]一種用于檢測MTHFR和MTRR基因多態性的組合物及其應用

有效

• 申請號: 201710698006.4
• 申請日: 2017-08-15
• 公開（公告）號: CN107385063B
• 公開（公告）日: 2020-10-09
• 發明（設計）人: 劉沛;王林海
• 申請（專利權）人: 北京鑫諾美迪基因檢測技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京同輝知識產權代理事務所(普通合伙) 11357
• 代理人: 孫艷敏;楊敬

1.一種用于檢測MTHFR和MTRR基因多態性的組合物，其特征在于，所述組合物包括針對用于檢測待檢樣品中分別與MTHFR和MTRR基因相關的特異性目的基因的引物對和探針，包括：

MTHFR677引物：

MTHFR677基因正向引物（MTHFR677-F）:SEQ ID NO.1；

MTHFR677基因反向引物（MTHFR677-R）:SEQ ID NO.2；

探針MTHFR677-CFP：SEQ ID NO.3；

探針MTHFR677-TFP：SEQ ID NO.4；

MTHFR1298引物對：

MTHFR1298基因正向引物（MTHFR1298-F）:SEQ ID NO.5；

MTHFR1298基因反向引物（MTHFR1298-R）: SEQ ID NO.6；

探針MTHFR1298-AF：SEQ ID NO.7；

探針MTHFR1298-CFP：SEQ ID NO.8；

MTRR66引物對：

MTRR66基因正向引物（MTRR66-F）：SEQ ID NO.9；

MTRR66基因反向引物（MTRR66-R）：SEQ ID NO.10；

探針MTRR66-AFP: SEQ ID NO.11；

探針MTRR66-GFP: SEQ ID NO.12；

內標引物對：

HER2-F: SEQ ID NO.13；

HER2-R: SEQ ID NO.14；

探針HER2-FP: SEQ ID NO.15；

其中對MTHFR677-CFP、MTHFR1298-AF和MTRR66-AFP的5，端進行FAM修飾，3，端進行BHQ1修飾；對MTHFR677-TFP、MTHFR1298-CFP和MTRR66-GFP的5，端進行ROX修飾，3，端進行BHQ2修飾；對HER2-FP的5，端進行HEX修飾，3，端進行BHQ1修飾；

在MTHFR677-CFP序列的第13位堿基C上增加鎖核酸（LNA）的修飾；

在MTHFR677-TFP序列的第13位堿基T上增加鎖核酸（LNA）的修飾；

在MTHFR1298-AF序列的第13位堿基A上增加鎖核酸（LNA）的修飾；

在MTHFR1298-CFP序列的第13位堿基C上增加鎖核酸（LNA）的修飾；

在MTRR66-AFP序列的第15位堿基A上增加鎖核酸（LNA）的修飾；

在MTRR66-GFP序列的第14位堿基G上增加鎖核酸（LNA）的修飾；

一人份加入量為：MTHFR677-F加入量0.1-0.3μL，MTHFR1298-F加入量0.1-0.3μL，MTRR66-F加入量0.1-0.3μL，MTHFR677-R加入量0.1-0.3μL，MTHFR1298-R加入量0.1-0.3μL，MTRR66-R加入量0.1-0.3μL，MTHFR677-CFP加入量0.01-0.2μL，MTHFR1298-AFP加入量0.01-0.2μL，MTRR66-AFP加入量0.01-0.2μL，MTHFR677-TFP加入量0.01-0.2μL，MTHFR1298-CFP加入量0.01-0.2μL，MTRR66-GFP加入量0.01-0.2μL，HER2-F加入量0.01-0.2μL，HER2-R加入量0.01-0.2μL，HER2-FP加入量0.01-0.2μL。

2.根據權利要求1所述的用于檢測MTHFR和MTRR基因多態性的組合物在制備用于檢測MTHFR和MTRR基因多態性的試劑中的應用。

3.一種用于檢測MTHFR和MTRR基因多態性的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權利要求1所述的用于檢測MTHFR和MTRR基因多態性的組合物。

4.根據權利要求3所述的用于檢測MTHFR和MTRR基因多態性的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括DNA聚合酶、dNTPs、10×DNA聚合酶buffer、UDG酶和Mg2+，一人份加入量為：DNA聚合酶加入量0.1-0.4μL，dNTPs加入量1-3μL，10×DNA聚合酶buffer 加入量1-4μL，UDG酶加入量0.01-0.2μL，Mg2+加入量2-5μL。