[發明專利]一種卵母細胞激活的物理方法及其受精潛能的評價指標

有效

• 申請號: 201710692030.7
• 申請日: 2017-08-14
• 公開（公告）號: CN107312749B
• 公開（公告）日: 2020-11-10
• 發明（設計）人: 鹿群;劉佳卉;梁蓉;國晉菘;王建六;王凱樂;董飛宏;張玨;方競
• 申請（專利權）人: 北京大學人民醫院;北京大學
• 主分類號: C12N5/075
• 分類號: C12N5/075;C12N13/00;G01N21/64;G01N21/63
• 代理公司: 北京萬象新悅知識產權代理有限公司 11360
• 代理人: 蘇愛華

1.一種卵母細胞激活的物理方法，其特征在于：將卵母細胞及卵母細胞培養液置于電極杯后施加電脈沖序列刺激卵母細胞；將電脈沖激活后的卵母細胞經培養液洗滌2-4次，移入36-37 ℃ 、5-10%CO₂ 的培養箱中連續培養7-8天；所述的電脈沖序列進行處理的具體步驟是先用電場強度為35kV/cm-50kV/cm，脈沖頻率為0.5Hz-1.5Hz，脈沖寬度為30ns-300ns的脈沖作用3-10秒，再用電場強度為5kV/cm-35kV/cm，脈沖頻率為0.5Hz-1.5Hz，脈沖寬度為10ns-30ns的脈沖作用3-5秒，其中卵母細胞為小鼠和大耳兔的卵母細胞。

2.權利要求1所述的卵母細胞激活的物理方法應用于評價卵母細胞受精潛能的方法，其特征在于：將權利要求1中所述的電脈沖刺激后的卵母細胞用鈣離子探針染色，置于共聚焦顯微鏡下，檢測胞漿內鈣離子濃度隨時間的變化；將鈣離子濃度峰值30%處上升到峰值所需要的時間與從峰值下降到峰值30%處所需時間之比用于反映卵母細胞激活效率，用鈣振蕩衰減因子反映有效囊胚率，鈣振蕩衰減因子如下：

其中：n為超過閾值的鈣峰個數，閾值為最大鈣離子濃度的70%，T為共聚焦顯微鏡的掃描時間；定義鈣峰個數大于等于10時，有效囊胚率為100%。