[發明專利]用于檢測沙門氏菌的引物系統和試劑盒以及他們的應用和檢測沙門氏菌的方法

在審

• 申請號: 201710690828.8
• 申請日: 2017-08-14
• 公開（公告）號: CN109402271A
• 公開（公告）日: 2019-03-01
• 發明（設計）人: 王超;馮婕;杜曉辰
• 申請（專利權）人: 中國科學院微生物研究所
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/10;C12N15/11
• 代理公司: 北京潤平知識產權代理有限公司 11283
• 代理人: 喬雪微;嚴政

1.一種用于檢測沙門氏菌的引物系統，其特征在于，該引物系統包括如SEQ ID No：1所示的正向外引物、如SEQ ID No：2所示的反向外引物、如SEQ ID No：3所示的正向內引物和如SEQ ID No：4所示的反向內引物。

2.根據權利要求1所述的引物系統，其中，外引物與內引物的摩爾比為1:4-12，優選為1:6-10。

3.根據權利要求1或2所述的引物系統，其中，所述引物系統還包括環引物，所述環引物為如SEQ ID No：5所示的引物序列和/或如SEQ ID No：6所示的引物序列；

優選的，外引物與環引物的摩爾比為1：1-5。

4.一種用于檢測沙門氏菌的試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括：權利要求1-3中任意一項所述的引物系統、dNTP、甜菜堿、硫酸鎂、氯化錳、鈣黃綠素、反應緩沖液以及DNA聚合酶。

5.根據權利要求4所述的試劑盒，其中，所述DNA聚合酶為Bst DNA聚合酶。

6.根據權利要求4所述的試劑盒，其中，所述反應緩沖液為Thermpol緩沖液。

7.權利要求1-3中任意一項所述的引物系統以及權利要求4-6中任意一項所述的試劑盒在檢測沙門氏菌中的應用。

8.一種檢測沙門氏菌的方法，其特征在于，該方法包括：將權利要求1-3中任意一項所述的引物系統、甜菜堿、硫酸鎂、氯化錳、鈣黃綠素、dNTP、DNA聚合酶以及反應緩沖液與DNA模板在60-65℃的條件下接觸反應，并通過反應體系的顏色變化判斷DNA模板中沙門氏菌基因的存在。

9.根據權利要求8所述的方法，其中，基于100微升的反應體系，權利要求1-3中任意一項所述的引物系統的用量為4×10^-4-6×10^-4微摩爾，甜菜堿的用量為60-100微摩爾，硫酸鎂的用量為0.3-0.9微摩爾，氯化錳的用量為0.01-0.1微摩爾，鈣黃綠素的用量為5×10^-4-5×10^-3微摩爾，dNTP的用量為0.1-0.2微摩爾，DNA聚合酶的用量為2-6U，反應緩沖液的用量為8-12微升，DNA模板的用量為60-100納克；

優選的，所述鈣黃綠素與氯化錳的用量摩爾比為1:5-30。

10.根據權利要求8或9所述的方法，其中，如果DNA模板中存在沙門氏菌基因組，則反應體系顏色有褐色變為熒光綠；如果DNA模板中不存在沙門氏菌基因組，則樣品體系無顏色變化或不變為熒光綠。