[發(fā)明專利]一種螺旋藻藻種的超低溫保存方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710689237.9
• 申請日: 2017-08-10
• 公開（公告）號: CN107593416B
• 公開（公告）日: 2020-04-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 高凌巖;高錦
• 申請（專利權(quán)）人: 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: A01G33/00
• 分類號: A01G33/00
• 代理公司: 深圳市威世博知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44280
• 代理人: 張靜

1.一種螺旋藻藻種的超低溫保存方法，其特征在于，通過將帶有螺旋藻孢子的培養(yǎng)液進(jìn)行冰凍保存的方式來保存螺旋藻藻種。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種螺旋藻藻種的超低溫保存方法，其特征在于，螺旋藻孢子進(jìn)行冰凍保存的具體步驟為：首先將帶有螺旋藻孢子的培養(yǎng)液進(jìn)行初步冰凍，初步冰凍溫度為-8～-20℃，初步冰凍時間為24～48h，然后在不高于-80℃溫度下凍存至任意時間。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的螺旋藻的超低溫保存方法，其特征在于，所述初步冰凍溫度優(yōu)選為-8～-12℃。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種螺旋藻藻種的超低溫保存方法，其特征在于，在帶有螺旋藻孢子的培養(yǎng)液中加入保護(hù)劑，所述保護(hù)劑為糖類保護(hù)劑或無機(jī)物保護(hù)劑。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種螺旋藻藻種的超低溫保存方法，其特征在于，所述糖類保護(hù)劑為單糖、雙糖或三糖中的任意一種或一種以上以任意比例的混合；所述糖類保護(hù)劑在所述培養(yǎng)液中的質(zhì)量百分比濃度為5～10％。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種螺旋藻藻種的超低溫保存方法，其特征在于，所述無機(jī)物保護(hù)劑為甘油或二甲基亞砜；所述無機(jī)物保護(hù)劑在所述培養(yǎng)液中的質(zhì)量百分比濃度為5～15％。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任意一項(xiàng)所述的螺旋藻的超低溫保存方法，其特征在于，在我國北方地區(qū)，螺旋藻藻種能夠在自然狀態(tài)下轉(zhuǎn)變?yōu)槁菪彐咦印?!-- SIPO -->

8.根據(jù)權(quán)利要求1-6任意一項(xiàng)所述的螺旋藻的超低溫保存方法，其特征在于，螺旋藻藻種能夠采用人工誘導(dǎo)方式轉(zhuǎn)變?yōu)槁菪彐咦樱唧w方法為：

A、獲取帶有螺旋藻藻種的培養(yǎng)液，在光照強(qiáng)度為120～129μmol.m^-2.s^-1，溫度為14～18℃條件下，誘導(dǎo)2h；在光照強(qiáng)度為230～239μmol.m^-2.s^-1，溫度為18～24℃條件下，誘導(dǎo)6h，在光照強(qiáng)度為120～129μmol.m^-2.s^-1，溫度為14～18℃條件下，誘導(dǎo)2h，在光照強(qiáng)度為0～3μmol.m^-2.s^-1，溫度為12～14℃條件下，誘導(dǎo)14h；然后重復(fù)步驟A中的上述誘導(dǎo)條件再誘導(dǎo)24h；

B、將完成步驟A誘導(dǎo)的培養(yǎng)液，在光照強(qiáng)度為120～129μmol.m^-2.s^-1，溫度為10～14℃條件下，誘導(dǎo)2h，在光照強(qiáng)度為230～239μmol.m^-2.s^-1，溫度為14～16℃條件下，誘導(dǎo)6h，在光照強(qiáng)度為120～129μmol.m^-2.s^-1，溫度為10～14℃條件下，誘導(dǎo)2h，在光照強(qiáng)度為0～3μmol.m^-2.s^-1，溫度為8～10℃條件下，誘導(dǎo)14h；然后重復(fù)步驟B中的上述誘導(dǎo)條件再誘導(dǎo)24h；

C、將完成步驟B誘導(dǎo)的培養(yǎng)液，在光照強(qiáng)度為120～129μmol.m^-2.s^-1，溫度為4～6℃條件下，誘導(dǎo)2h，在光照強(qiáng)度為230～239μmol.m^-2.s^-1，溫度為6～8℃條件下，誘導(dǎo)6h，在光照強(qiáng)度為120～129μmol.m^-2.s^-1，溫度為4～6℃條件下，誘導(dǎo)2h，在光照強(qiáng)度為0～3μmol.m^-2.s^-1，溫度為0～3℃條件下，誘導(dǎo)14h；然后重復(fù)步驟C中的上述誘導(dǎo)條件再誘導(dǎo)24h；

D、將完成步驟C誘導(dǎo)的培養(yǎng)液，在光照強(qiáng)度為120～129μmol.m^-2.s^-1，溫度為3～4℃條件下，誘導(dǎo)2h，在光照強(qiáng)度為230～239μmol.m^-2.s^-1，溫度為4℃條件下，誘導(dǎo)6h，在光照強(qiáng)度為120～129μmol.m^-2.s^-1，溫度為3～4℃條件下，誘導(dǎo)2h，在光照強(qiáng)度為0～3μmol.m^-2.s^-1，溫度為0～2℃，誘導(dǎo)14h；然后重復(fù)步驟D中的上述誘導(dǎo)條件再誘導(dǎo)24h，此時，如螺旋藻藻種轉(zhuǎn)變?yōu)槁菪彐咦樱瑒t結(jié)束誘導(dǎo)；如螺旋藻藻種未轉(zhuǎn)變?yōu)槁菪彐咦樱瑒t繼續(xù)步驟E的誘導(dǎo)；

E、將完成步驟D誘導(dǎo)且未轉(zhuǎn)變?yōu)槁菪彐咦拥呐囵B(yǎng)液，在光照強(qiáng)度為120～129μmol.m^-2.s^-1，溫度為1～2℃條件下，誘導(dǎo)2h，在光照強(qiáng)度為230～239μmol.m^-2.s^-1，溫度為2℃條件下，誘導(dǎo)6h，在光照強(qiáng)度為120～129μmol.m^-2.s^-1，溫度為1～2℃條件下，誘導(dǎo)2h，在光照強(qiáng)度為0～3μmol.m^-2.s^-1，溫度為0℃條件下，誘導(dǎo)14h；然后重復(fù)步驟E中的上述誘導(dǎo)條件循環(huán)誘導(dǎo)，直至螺旋藻藻種轉(zhuǎn)變?yōu)槁菪彐咦樱Y(jié)束誘導(dǎo)。

9.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一所述的螺旋藻的超低溫保存方法，其特征在于，其還包括有解凍步驟，具體為，首先，將凍存的螺旋藻孢子，轉(zhuǎn)至-12℃溫度下解凍92h，然后，在最低溫度大于0℃，最高溫度不大于2℃條件下解凍至冰完全融化，最后，在最高溫度不高于8℃，最低溫度不低于0℃條件下培養(yǎng)，直至螺旋藻孢子恢復(fù)為螺旋藻藻種。