[發明專利]一種螺旋藻藻種的超低溫保存方法

有效

• 申請號: 201710689237.9
• 申請日: 2017-08-10
• 公開（公告）號: CN107593416B
• 公開（公告）日: 2020-04-10
• 發明（設計）人: 高凌巖;高錦
• 申請（專利權）人: 內蒙古農業大學
• 主分類號: A01G33/00
• 分類號: A01G33/00
• 代理公司: 深圳市威世博知識產權代理事務所(普通合伙) 44280
• 代理人: 張靜

1.一種螺旋藻藻種的超低溫保存方法，其特征在于，通過將帶有螺旋藻孢子的培養液進行冰凍保存的方式來保存螺旋藻藻種。

2.根據權利要求1所述的一種螺旋藻藻種的超低溫保存方法，其特征在于，螺旋藻孢子進行冰凍保存的具體步驟為：首先將帶有螺旋藻孢子的培養液進行初步冰凍，初步冰凍溫度為-8～-20℃，初步冰凍時間為24～48h，然后在不高于-80℃溫度下凍存至任意時間。

3.根據權利要求2所述的螺旋藻的超低溫保存方法，其特征在于，所述初步冰凍溫度優選為-8～-12℃。

4.根據權利要求3所述的一種螺旋藻藻種的超低溫保存方法，其特征在于，在帶有螺旋藻孢子的培養液中加入保護劑，所述保護劑為糖類保護劑或無機物保護劑。

5.根據權利要求4所述的一種螺旋藻藻種的超低溫保存方法，其特征在于，所述糖類保護劑為單糖、雙糖或三糖中的任意一種或一種以上以任意比例的混合；所述糖類保護劑在所述培養液中的質量百分比濃度為5～10％。

6.根據權利要求4所述的一種螺旋藻藻種的超低溫保存方法，其特征在于，所述無機物保護劑為甘油或二甲基亞砜；所述無機物保護劑在所述培養液中的質量百分比濃度為5～15％。

7.根據權利要求1-6任意一項所述的螺旋藻的超低溫保存方法，其特征在于，在我國北方地區，螺旋藻藻種能夠在自然狀態下轉變為螺旋藻孢子。

8.根據權利要求1-6任意一項所述的螺旋藻的超低溫保存方法，其特征在于，螺旋藻藻種能夠采用人工誘導方式轉變為螺旋藻孢子，具體方法為：

A、獲取帶有螺旋藻藻種的培養液，在光照強度為120～129μmol.m^-2.s^-1，溫度為14～18℃條件下，誘導2h；在光照強度為230～239μmol.m^-2.s^-1，溫度為18～24℃條件下，誘導6h，在光照強度為120～129μmol.m^-2.s^-1，溫度為14～18℃條件下，誘導2h，在光照強度為0～3μmol.m^-2.s^-1，溫度為12～14℃條件下，誘導14h；然后重復步驟A中的上述誘導條件再誘導24h；

B、將完成步驟A誘導的培養液，在光照強度為120～129μmol.m^-2.s^-1，溫度為10～14℃條件下，誘導2h，在光照強度為230～239μmol.m^-2.s^-1，溫度為14～16℃條件下，誘導6h，在光照強度為120～129μmol.m^-2.s^-1，溫度為10～14℃條件下，誘導2h，在光照強度為0～3μmol.m^-2.s^-1，溫度為8～10℃條件下，誘導14h；然后重復步驟B中的上述誘導條件再誘導24h；

C、將完成步驟B誘導的培養液，在光照強度為120～129μmol.m^-2.s^-1，溫度為4～6℃條件下，誘導2h，在光照強度為230～239μmol.m^-2.s^-1，溫度為6～8℃條件下，誘導6h，在光照強度為120～129μmol.m^-2.s^-1，溫度為4～6℃條件下，誘導2h，在光照強度為0～3μmol.m^-2.s^-1，溫度為0～3℃條件下，誘導14h；然后重復步驟C中的上述誘導條件再誘導24h；

D、將完成步驟C誘導的培養液，在光照強度為120～129μmol.m^-2.s^-1，溫度為3～4℃條件下，誘導2h，在光照強度為230～239μmol.m^-2.s^-1，溫度為4℃條件下，誘導6h，在光照強度為120～129μmol.m^-2.s^-1，溫度為3～4℃條件下，誘導2h，在光照強度為0～3μmol.m^-2.s^-1，溫度為0～2℃，誘導14h；然后重復步驟D中的上述誘導條件再誘導24h，此時，如螺旋藻藻種轉變為螺旋藻孢子，則結束誘導；如螺旋藻藻種未轉變為螺旋藻孢子，則繼續步驟E的誘導；

E、將完成步驟D誘導且未轉變為螺旋藻孢子的培養液，在光照強度為120～129μmol.m^-2.s^-1，溫度為1～2℃條件下，誘導2h，在光照強度為230～239μmol.m^-2.s^-1，溫度為2℃條件下，誘導6h，在光照強度為120～129μmol.m^-2.s^-1，溫度為1～2℃條件下，誘導2h，在光照強度為0～3μmol.m^-2.s^-1，溫度為0℃條件下，誘導14h；然后重復步驟E中的上述誘導條件循環誘導，直至螺旋藻藻種轉變為螺旋藻孢子，結束誘導。

9.根據權利要求1-6任一所述的螺旋藻的超低溫保存方法，其特征在于，其還包括有解凍步驟，具體為，首先，將凍存的螺旋藻孢子，轉至-12℃溫度下解凍92h，然后，在最低溫度大于0℃，最高溫度不大于2℃條件下解凍至冰完全融化，最后，在最高溫度不高于8℃，最低溫度不低于0℃條件下培養，直至螺旋藻孢子恢復為螺旋藻藻種。