[發明專利]一種螺旋藻藻種的超低溫保存方法

有效

• 申請號: 201710689237.9
• 申請日: 2017-08-10
• 公開（公告）號: CN107593416B
• 公開（公告）日: 2020-04-10
• 發明（設計）人: 高凌巖;高錦
• 申請（專利權）人: 內蒙古農業大學
• 主分類號: A01G33/00
• 分類號: A01G33/00
• 代理公司: 深圳市威世博知識產權代理事務所(普通合伙) 44280
• 代理人: 張靜

技術領域：

本發明涉及一種螺旋藻保存方法，特別是涉及一種螺旋藻藻種的超低溫保存方法。

背景技術：

螺旋藻是原核生物，由一列細胞構成的絲狀體個體，有或松或緊的螺旋(見圖1)，所以稱螺旋藻。

螺旋藻因為具有多種微量元素、多種維生素、多種寡聚糖和多種不飽和脂肪酸，而受到保健品商業的推崇，在世界范圍內生產；同時螺旋藻是一種較好的遺傳工程實驗材料，因為螺旋藻相比大腸桿菌、病毒等的安全性好，是一種健康的原核生物。生產上需要保存純正的藻種，螺旋藻的研究更需要無污染、無遺傳漂變的純正藻種。

目前，國內外在業內都公認為：螺旋藻無休眠孢子(或厚壁細胞)，為斷裂的生殖方式，在螺旋藻的保存實踐中，國內外使用的都是傳統的繼代培養法，而常規繼代培養的保存不能保證無污染、無遺傳漂變，在螺旋藻傳統的繼代培養保存過程中，存在遺傳漂移，性狀丟失等問題，而且還費時、費力、費人工，而關于螺旋藻超低溫保存的研究鮮有報道。

發明內容：

為了解決螺旋藻傳統的繼代培養保存過程中，發生遺傳漂移，性狀丟失等問題，本發明提供一種無污染、無遺傳漂變、省時、省力、低成本的螺旋藻的超低溫保存方法。

本發明的目的由如下技術方案實施：一種螺旋藻藻種的超低溫保存方法，通過將帶有螺旋藻孢子的培養液進行冰凍保存的方式來保存螺旋藻藻種。

螺旋藻孢子進行冰凍保存的具體步驟為：首先將帶有螺旋藻孢子的培養液進行初步冰凍，初步冰凍溫度為-8～-20℃，初步冰凍時間為24～48h，然后在不高于-80℃溫度下凍存至任意時間。

優選的，所述初步冰凍溫度優選為-8～-12℃。

優選的，在帶有螺旋藻孢子的培養液中加入保護劑，所述保護劑為糖類保護劑或無機物保護劑。

具體的，所述糖類保護劑為單糖、雙糖或三糖中的任意一種或一種以上以任意比例的混合；所述糖類保護劑在所述培養液中的質量百分比濃度為5～10％。

具體的，所述無機物保護劑為甘油或二甲基亞砜；所述無機物保護劑在所述培養液中的質量百分比濃度為5～15％。

在我國北方地區，螺旋藻藻種能夠在自然狀態下轉變為螺旋藻孢子。申請者還發現分布在內蒙古鄂爾多斯養殖大棚中的螺旋藻是以孢子的形式越冬(見圖2)，而且通過分析圖1與圖2中的生物的16-23rDNA的比對，2者是一種生物，換言之：圖2的生物是圖1生物的孢子狀態。

或者，螺旋藻藻種能夠采用人工誘導方式轉變為螺旋藻孢子，具體方法為：

A、獲取帶有螺旋藻藻種的培養液，在光照強度為120～129μmol.m^-2.s^-1，溫度為14～18℃條件下，誘導2h；在光照強度為230～239μmol.m^-2.s^-1，溫度為18～24℃條件下，誘導6h，在光照強度為120～129μmol.m^-2.s^-1，溫度為14～18℃條件下，誘導2h，在光照強度為0～3μmol.m^-2.s^-1，溫度為12～14℃條件下，誘導14h；然后重復步驟A中的上述誘導條件再誘導24h；

B、將完成步驟A誘導的培養液，在光照強度為120～129μmol.m^-2.s^-1，溫度為10～14℃條件下，誘導2h，在光照強度為230～239μmol.m^-2.s^-1，溫度為14～16℃條件下，誘導6h，在光照強度為120～129μmol.m^-2.s^-1，溫度為10～14℃條件下，誘導2h，在光照強度為0～3μmol.m^-2.s^-1，溫度為8～10℃條件下，誘導14h；然后重復步驟B中的上述誘導條件再誘導24h；