[發(fā)明專利]rAAV8-CRISPR-SaCas9系統(tǒng)及在制備乙肝治療藥物中的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710688779.4
• 申請日: 2017-08-13
• 公開（公告）號: CN107446923B
• 公開（公告）日: 2019-12-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 宋宏彬;李浩;邱少富;生春雨;楊超杰;劉鴻博;王珊;賈雷立;謝靖;王立貴;李鵬;孫巖松
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍疾病預(yù)防控制所
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/864;C12N7/01;A61K48/00;A61P1/16;A61P31/20
• 代理公司: 11478 北京市眾天律師事務(wù)所
• 代理人: 李新軍

1.一種gRNA分子，所述gRNA分子在CRISPR-Cas9系統(tǒng)中能夠以乙肝病毒基因組特定位點(diǎn)為靶序列進(jìn)行DNA序列的編輯，其特征在于，所述gRNA分子的序列如SEQ ID NO:4、6、10、13、14、15、16或者20所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的gRNA分子，其特征在于，所述gRNA分子的序列如SEQ ID NO:4或者20所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的gRNA分子，其特征在于，所述gRNA分子的序列如SEQ ID NO:4所示。

4.一種含有權(quán)利要求1-3任一所述的gRNA分子的CRISPR-SaCas9系統(tǒng)，其特征在于，所述gRNA分子與能表達(dá)SaCas9蛋白的表達(dá)載體相連接。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的CRISPR-SaCas9系統(tǒng)，其特征在于，所述載體為質(zhì)粒pX601-AAV-CMV::NLS-SaCas9-NLS-3xHA-bGHpA；U6::BsaI-sgRNA。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述CRISPR-Cas9系統(tǒng)在制備治療乙肝藥物中的應(yīng)用。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述CRISPR-SaCas9系統(tǒng)被包裝于重組腺相關(guān)病毒基因組中。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述病毒為VIII型重組腺相關(guān)病毒。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物被制備為注射劑。

10.一種將權(quán)利要求5所述CRISPR-SaCas9系統(tǒng)包裝入VIII型重組腺相關(guān)病毒的方法，所述方法包括：

(1)權(quán)利要求1-3任一所述的gRNA分子與表達(dá)載體相連；

(2)步驟(1)獲得的表達(dá)載體與包裝質(zhì)粒pAAV-RC和輔助質(zhì)粒pHelper共同轉(zhuǎn)染至宿主細(xì)胞HEK293細(xì)胞中；

(3)裂解步驟(2)獲得的宿主細(xì)胞，并收獲位于裂解上清液中的獲得包裝的病毒。