[發(fā)明專利]基于全自動在線固相萃取?超高效液相色譜?線性離子阱串聯(lián)質(zhì)譜測定水中藻類毒素的方法

在審

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• 申請日: 2017-08-11
• 公開（公告）號: CN107389825A
• 公開（公告）日: 2017-11-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐瀟穎;劉柱;羅金文;陳萬勤;梁晶晶;周霞;趙超群;丁宇琦
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江省食品藥品檢驗(yàn)研究院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/08
• 代理公司: 杭州浙科專利事務(wù)所(普通合伙)33213
• 代理人: 沈淵琪

本發(fā)明公開了一種基于全自動在線固相萃取?超高效液相色譜?線性離子阱串聯(lián)質(zhì)譜測定水中藻類毒素的方法，它通過配制樣品溶液、線性溶液、空白溶液及加標(biāo)回收試驗(yàn)樣品溶液，利用在線固相萃取，實(shí)現(xiàn)水中藻類毒素在線富集的目的，大大提高了檢測效率，降低了實(shí)驗(yàn)人員的勞動強(qiáng)度，解決了傳統(tǒng)分析過程中存在的前處理方法操作繁瑣、樣品檢測周期長、人工預(yù)處理的重現(xiàn)性難以保證等問題。同時(shí)結(jié)合線性離子阱串聯(lián)質(zhì)譜法和內(nèi)標(biāo)法，保證了水中痕量多種藻類毒素同時(shí)分析時(shí)的準(zhǔn)確定量以及精確定性，提升了藻類毒素的檢測能力，為政府行政部門的分析監(jiān)管提供先進(jìn)技術(shù)支撐。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于食品安全檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及水中藻類毒素的測定方法，尤其是基于全自動在線固相萃取-超高效液相色譜-線性離子阱串聯(lián)質(zhì)譜的方法。

現(xiàn)有技術(shù)

現(xiàn)有檢測水樣中藻類毒素的方法，存在測定種類有限，前處理過程操作繁瑣，采用C18、HLB、等固相萃取柱進(jìn)行離線富集，耗費(fèi)大量的前處理時(shí)間，受人工技術(shù)影響大，實(shí)驗(yàn)過程中會接觸到有毒有害的試劑。

現(xiàn)有技術(shù)一般采用液相或液質(zhì)聯(lián)用法技術(shù)居多，但對于水中痕量藻類毒素測定時(shí)，質(zhì)譜法也會出現(xiàn)峰度比無法完全匹配的現(xiàn)象，導(dǎo)致無法確證。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述問題，本發(fā)明的目的在于提供基于全自動在線固相萃取-超高效液相色譜-線性離子阱串聯(lián)質(zhì)譜測定水中藻類毒素的方法。它要解決傳統(tǒng)分析技術(shù)中，存在的水體中痕量藻類毒素伏擊過程的前處理方法操作繁瑣、樣品檢測周期長、人工預(yù)處理的重現(xiàn)性難以保證以及多種藻類毒素同時(shí)分析時(shí)很難滿足均取得很好的定性定量效果的問題。

所述的基于全自動在線固相萃取-超高效液相色譜-線性離子阱串聯(lián)質(zhì)譜測定水中藻類毒素的方法，其特征在于包括如下步驟：

1）混合標(biāo)準(zhǔn)品工作溶液的配制：分別精密移取0.5mL 5μg/mL的各藻類毒素儲備液至5mL容量瓶中，用甲醇定容，再精密移取1.0 mL混合液至另一10 mL容量瓶中，用甲醇定容，制成50 ng/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)品工作溶液，于-18℃下保存?zhèn)溆茫?/p>

2）同位素內(nèi)標(biāo)工作溶液的配制：精密移取0.1 mL 10 μg/mL的內(nèi)標(biāo)儲備液至10 mL容量瓶中，用甲醇定容，再精密移取0.5 mL定容的容量瓶中內(nèi)標(biāo)儲備液至5 mL容量瓶中，用甲醇定容，制得10 ng/mL的內(nèi)標(biāo)工作溶液，于-18℃下保存?zhèn)溆茫?/p>

3）線性溶液的制備：用超純水稀釋藻類毒素濃度在0.02-8.0 ng/mL范圍內(nèi)，內(nèi)標(biāo)濃度均為0.5 ng/mL的線性標(biāo)準(zhǔn)溶液，供色譜測定；

4）加標(biāo)回收試驗(yàn)樣品溶液的制備：取不含藻類毒素的樣品，置50 mL高速離心管中，精密加入不同量的步驟1）制得的混合標(biāo)準(zhǔn)品工作溶液，獲得檢出限為0.005 ng/mL、定量限為0.015 ng/mL、低、中、高不同水平濃度分別為0.02 ng/mL、0.1 ng/mL、1.0 ng/mL的加標(biāo)試驗(yàn)樣品，再向該加標(biāo)試驗(yàn)樣品中精密加入步驟2）同位素內(nèi)標(biāo)工作溶液，使制得加標(biāo)回收試驗(yàn)樣品溶液內(nèi)標(biāo)濃度均為0.5 ng/mL，過膜后，供色譜測定；

5）用全自動在線固相萃取-超高效液相色譜-線性離子阱串聯(lián)質(zhì)譜法測定樣品溶液、線性溶液、空白溶液及加標(biāo)回收試驗(yàn)樣品溶液：

a 測定：進(jìn)樣過程：由程序控制使自動進(jìn)樣器實(shí)現(xiàn)200 μL連續(xù)2次進(jìn)樣，吸取樣品溶液、線性溶液及加標(biāo)回收試驗(yàn)樣品溶液注入色譜儀中，以在線固相萃取-超高效液相色譜-線性離子阱串聯(lián)質(zhì)譜法，測定樣品溶液中的目標(biāo)化合物峰面積、內(nèi)標(biāo)化合物峰面積；線性溶液中目標(biāo)化合物峰面積、內(nèi)標(biāo)化合物峰面積；加標(biāo)回收試驗(yàn)樣品溶液中目標(biāo)化合物峰面積、內(nèi)標(biāo)化合物峰面積，標(biāo)準(zhǔn)工作溶液及試樣溶液中待測組分的響應(yīng)值均應(yīng)在監(jiān)測器的線性范圍之內(nèi)；

b 曲線方程斜率、曲線方程截距的計(jì)算

以線性溶液中的目標(biāo)化合物峰面積比內(nèi)標(biāo)化合物峰面積定量，得到曲線方程A=aC+b，