[發明專利]聚離子液體磁性納米復合物及其對痕量循環腫瘤細胞特異性富集和檢測的應用

有效

• 申請號: 201710686464.6
• 申請日: 2017-08-11
• 公開（公告）號: CN107525920B
• 公開（公告）日: 2019-04-16
• 發明（設計）人: 印曉星;于妍妍;郁超;湯道權;楊淵;李成林
• 申請（專利權）人: 徐州醫科大學
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533;C12N5/09
• 代理公司: 南京思拓知識產權代理事務所(普通合伙) 32288
• 代理人: 呂鵬濤

1.一種能夠對痕量循環腫瘤細胞特異性富集和檢測的聚離子液體磁性納米復合物，其特征在于它由如下步驟制備而成：

（A）羧基功能化離子液體單體的合成：將溴乙酸和1-乙烯基咪唑在甲苯中于50～60 ℃下反應，得到羧基功能化離子液體單體；

（B）Fe₃O₄/SH磁性納米球的合成：將Fe₃O₄磁性納米球分散在溶劑中，加入3-巰基丙基三甲氧基硅烷進行反應，得到Fe₃O₄/SH磁性納米球；

（C）聚離子液體功能化磁珠的合成：將Fe₃O₄/SH磁性納米球與羧基功能化離子液體單體和交聯劑在乙醇中混合后，加入引發劑于60～80℃進行聚合反應，得到聚離子液體功能化磁珠MNs；

所述交聯劑的合成方法為：將1-乙烯基咪唑和1,4-二溴丁烷在甲醇中混合后，在50～60 ℃攪拌反應，反應后將反應混合物冷卻，然后加入乙醚中，將所得的半透明溶液冷置后分離產物，洗滌干燥；

（D）聚離子液體磁性納米復合物的制備：將MNs分散于含EDC和NHS的PBS溶液中進行活化，然后通過磁場分離活化的MNs，將其重新懸浮于PBS溶液中，加入EpCAM抗體進行孵育，多次洗滌，得到聚離子液體磁性納米復合物IMNs。

2.根據權利要求1所述的聚離子液體磁性納米復合物，其特征在于所述Fe₃O₄磁性納米球由FeCl₃在乙二醇和水中溶解后與乙酸鈉和聚乙二醇反應后制得。

3.根據權利要求1所述的聚離子液體磁性納米復合物，其特征在于在步驟（B）中，所述溶劑為甲苯，Fe₃O₄磁性納米球與3-巰基丙基三甲氧基硅烷的用量比為1:0.1～3g/mL，反應溫度為60～100℃；反應后的產物冷卻后，依次用甲苯、甲醇、去離子水和乙醇洗滌，然后干燥，置于1～5 ℃的條件下備用。

4.根據權利要求1所述的聚離子液體磁性納米復合物，其特征在于在步驟（C）中，反應后將獲得反應物冷卻、清洗、干燥后，置于1～5 ℃的條件下備用；其中Fe₃O₄/SH磁性納米球與羧基功能化離子液體單體和交聯劑的用量比分別為1:0.01～0.04g/mol，所述引發劑為AIBN。

5.根據權利要求1所述的聚離子液體磁性納米復合物，其特征在于在步驟（D）中，先將MNs分散于含EDC和NHS的pH 6.7～6.9的PBS的溶液中進行活化，然后通過磁場分離活化的MNs，再用pH 7.3～7.5的PBS洗滌，將其重新懸浮于pH 7.3～7.5的PBS溶液中，加入EpCAM抗體進行孵育，然后用pH 7.3～7.5的PBS洗滌，最后將其儲存于pH 7.3～7.5的PBS中，置于1～5 ℃的條件下保存。

6.根據權利要求1所述的聚離子液體磁性納米復合物，其特征在于在步驟（D）中，MNs與EpCAM抗體的質量比為1:0.05～0.2，活化和孵育溫度均為1～5 ℃。

7.根據權利要求1所述的聚離子液體磁性納米復合物，其特征在于所述羧基功能化離子液體單體的制備方法為：將溴乙酸溶于甲苯后，緩慢加入 1-乙烯基咪唑，在50～60 ℃下攪拌反應，反應后分離出固體，干燥即得。

8.根據權利要求1所述的聚離子液體磁性納米復合物，其特征在于所述Fe₃O₄磁性納米球的合成方法為：取FeCl₃、乙二醇和水混合攪拌至溶解， 隨后加入乙酸鈉和聚乙二醇進行高速攪拌，得到透明溶液，然后在高壓釜中于160～210 ℃進行反應，反應后將所得產物冷卻、洗滌、干燥，即得。