[發明專利]一種強廣譜啟動子及其應用有效
| 申請號： | 201710686341.2 | 申請日： | 2017-08-11 |
| 公開（公告）號： | CN107287201B | 公開（公告）日： | 2019-12-24 |
| 發明（設計）人： | 康振;陳堅;楊森;堵國成 | 申請（專利權）人： | 江南大學 |
| 主分類號： | C12N15/113 | 分類號： | C12N15/113;C12N15/70;C12N15/75;C12N15/81 |
| 代理公司： | 23211 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 | 代理人： | 張勇 |
| 地址： | 214122 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 廣譜 啟動子 及其 應用 | ||
1.一種強廣譜啟動子，其特征在于，所述啟動子序列如SEQ ID NO.1所示。
2.根據權利要求1所述的強廣譜啟動子，其特征在于，所述強廣譜啟動子可以應用于多個宿主，所述多個宿主包含大腸桿菌、枯草芽孢桿菌或釀酒酵母。
3.權利要求1所述強廣譜啟動子的構建方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：
(1)挑選一個具有高活力的釀酒酵母啟動子；
(2)在上述啟動子非核心區域插入原核細菌保守啟動子序列；
(3)將構建好的新啟動子和熒光蛋白基因相連，其中采用原核細菌通用的核糖體結合位點；
(4)將啟動子和熒光蛋白基因一起分別插入到多個宿主的表達載體上，并轉入相應宿主，通過熒光顯微鏡和熒光酶標儀來進行定性和定量。
4.權利要求3中所述的構建方法，其特征在于，所述高活力的釀酒酵母啟動子Pmin，其序列如SEQ ID NO.2所示。
5.權利要求3中所述的構建方法，其特征在于，所述原核細菌保守啟動子序列包含TTGACA和TATAAT兩段DNA序列，其間隔序列如SEQ ID NO.3所示。
6.權利要求3中所述的構建方法，其特征在于，所述原核細菌通用核糖體結合位點序列如SEQ ID NO.4所示。
7.一種廣譜的遺傳霉素抗性基因表達框，其特征在于，序列如SEQ ID NO.5所示，所述序列包含權利要求1中所述強廣譜啟動子、權利要求6中所述原核細菌通用核糖體結合位點、遺傳霉素抗性基因、原核轉錄終止子和真核轉錄終止子。
8.一種大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和釀酒酵母穿梭載體，其特征在于，序列如SEQ IDNO.6所示，所述序列包含有大腸桿菌載體pUC18復制子、枯草芽孢桿菌載體pUB110復制子、釀酒酵母載體pY26復制子和權利要求7中所述廣譜的遺傳霉素抗性基因表達框。
9.權利要求8所述的一種大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和釀酒酵母穿梭載體在蛋白合成、代謝產物生產或載體構建方面的應用。
10.權利要求1所述強廣譜啟動子在蛋白合成、代謝產物生產或載體構建方面的應用。
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