[發(fā)明專利]高密度脂蛋白膽固醇檢測(cè)試劑盒及其使用方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710681745.2
• 申請(qǐng)日: 2017-08-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107449748B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-08-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄭佳;孫文勇;常俊駿;梁芬
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 東軟威特曼生物科技（南京）有限公司
• 主分類號(hào): G01N21/31
• 分類號(hào): G01N21/31;G01N1/38
• 代理公司: 北京中企鴻陽(yáng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11487
• 代理人: 郭鴻雁

本發(fā)明高密度脂蛋白膽固醇檢測(cè)試劑盒及其使用方法涉及生化檢測(cè)領(lǐng)域。其目的是為了提供一種穩(wěn)定性高、毒性低、準(zhǔn)確度和精密度高的高密度脂蛋白膽固醇檢測(cè)試劑盒其使用方法。本發(fā)明的試劑盒包括試劑1：表面活性劑；聚乙烯硫酸鹽；十二烷基硫酸鈉；復(fù)合穩(wěn)定劑；氯化鈣；膽固醇氧化酶；膽固醇酯酶；抗壞血酸氧化酶；過(guò)氧化氫酶；4?氨基安替比林；proclin系列防腐劑；乙二醇；蔗糖；其余為緩沖液；試劑2：表面活性劑；聚氧乙烯亞烷基三芐基；乙二醇；蔗糖；過(guò)氧化物酶等。本發(fā)明試劑盒采用多種混合表面活性劑，包括泊洛沙姆系列、聚乙烯硫酸鹽、十二烷基硫酸鈉等，比傳統(tǒng)方法采用的聚陰離子相比較，其具有更好的特異性和選擇性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生化檢測(cè)領(lǐng)域，特別是涉及一種借助于測(cè)定材料的化學(xué)物理性質(zhì)來(lái)測(cè)定材料的試劑盒。

背景技術(shù)

高密度脂蛋白膽固醇測(cè)定方法有多種，目前市場(chǎng)上多為勻相測(cè)定法，包括PEG修飾酶法、免疫分離法、選擇性抑制法、清除法。其中，清除法是目前被認(rèn)為最為理想和有效的測(cè)定方法，該方法包括兩種類型，一是反應(yīng)促進(jìn)劑過(guò)氧化物酶清除法(SPD法)，二是過(guò)氧化氫酶清除法(CAT法)。

SPD法測(cè)定原理是基于脂蛋白與表面活性劑的親和性差異。試劑1中，在反應(yīng)促進(jìn)劑的作用下，血清中乳糜微粒(CM)、極低密度脂蛋白(VLDL)和低密度脂蛋白(LDL)形成可溶性復(fù)合物，其表層的游離膽固醇在膽固醇氧化酶(CHOD)作用下生成H₂O₂，在過(guò)氧化物酶(POD)的作用下被最終清除。試劑2包含特殊表面活性劑，作用于高密度脂蛋白(HDL)，使其發(fā)生裂解，釋放出HDL中的膽固醇，與酶試劑反應(yīng)并顯色。

CAT法在反應(yīng)過(guò)程中不會(huì)形成可溶性復(fù)合物，而是在特殊表面活性劑的作用下，CM、VLDL和LDL中的膽固醇與酶試劑反應(yīng)生成H₂O₂，H₂O₂被過(guò)氧化氫酶(CAT)分解為H₂O和O₂而被清除，試劑2中應(yīng)加入疊氮鈉，抑制CAT的活性，同時(shí)，另一表面活性劑使HDL顆粒發(fā)生解離，使其膽固醇暴露，與膽固醇酶試劑反應(yīng)并顯色。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種穩(wěn)定性高、毒性低、不生成沉淀、準(zhǔn)確度和精密度高的高密度脂蛋白膽固醇檢測(cè)試劑盒其使用方法。

本發(fā)明涉及一種高密度脂蛋白膽固醇檢測(cè)試劑盒，所述試劑盒包括試劑1；所述試劑1包括：膽固醇氧化酶和膽固醇酯酶。

優(yōu)選地，所述試劑盒還包括試劑2；

所述試劑1包括：

其余為GOOD’S緩沖液MOPS(3-(N-嗎啡啉)丙磺酸)(MOPS為緩沖液的主要成分)，所述緩沖液pH值為7.0；

所述試劑2包括：

其余為GOOD’S緩沖液MOPS，所述緩沖液pH值為7.0。

優(yōu)選地，所述復(fù)合穩(wěn)定劑包括吐溫80 10～13g/L，谷氨酸20～30g/L，谷胱甘肽1～3g/L，海藻糖50～60g/L，十二烷基二甲基甜菜堿2～6g/L，卵磷脂3～6g/L，緩沖液100～120mmol/L；其為申請(qǐng)?zhí)枮?01610166107.2的多種抗體的復(fù)合穩(wěn)定劑及其使用方法中的復(fù)合穩(wěn)定劑。

優(yōu)選地，所述試劑1包括：

其余為GOOD’S緩沖液MOPS，所述緩沖液pH值為7.0；

所述試劑2包括：