[發明專利]基于重水標記的拉曼光譜快速檢測牛奶中沙門氏菌的方法

在審

• 申請號: 201710680746.5
• 申請日: 2017-08-10
• 公開（公告）號: CN107505306A
• 公開（公告）日: 2017-12-22
• 發明（設計）人: 馮敬敬;謝云飛;姚衛蓉;郭亞輝;成玉梁;錢和
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65
• 代理公司: 南京利豐知識產權代理事務所(特殊普通合伙)32256
• 代理人: 王茹,王鋒

技術領域

本發明涉及一種檢測牛奶中沙門氏菌的方法，具體涉及一種基于重水(D₂O)標記的拉曼光譜快速檢測牛奶中沙門氏菌的方法，屬于致病菌檢測技術領域。

背景技術

沙門氏菌是一種常見的食源性致病菌，是需氧兼性厭氧的無芽孢菌，屬革蘭氏陰性腸桿菌科，已發現的近一千種(或菌株)。其可在溫度范圍(10-42℃)很廣的條件下生長，最適溫度為37℃，最佳pH值為6.8-7.8。沙門氏菌分布廣，有些可引起人類、家畜以及野生禽獸動物的疾病，是引起人類食物中毒的重要病原菌。據統計近年來在世界各國細菌性食物中毒中，沙門氏菌引起的食物中毒經常列榜首，我國內陸地區也以沙門氏菌為首位，對人們造成了很大的健康危害和經濟損失。當前食品安全問題突出，由食源性致病菌引起的食品安全問題，更是引起了各國政府和學術研究機構的重視。

在國內沙門氏菌檢測的常規方法，多采用微生物培養的傳統方法，其主要步驟包括前增菌(8-18h)、增菌(18-24h)、平板培養分離(18-24h)、生化試驗和血清學鑒定等步驟。該方法結果準確可靠，但操作繁瑣，耗時長，且需要多種試劑，已不能滿足當代食源性致病菌的檢測需求。

發明內容

本發明的主要目的在于提供一種基于重水標記的拉曼光譜快速檢測牛奶中沙門氏菌的方法，其具有操作簡便、快速便捷等特點，從而克服了現有技術中的不足。

為實現上述發明目的，本發明采用了如下技術方案：

本發明實施例提供了一種基于重水標記的拉曼光譜快速檢測牛奶中沙門氏菌的方法，其包括：

將可能含有沙門氏菌的待測牛奶加入含重水的培養基進行培養，之后收集培養后的菌體細胞進行拉曼光譜掃描，并對獲得的原始拉曼光譜進行分析處理，實現對待測牛奶中沙門氏菌的檢測。

在一些較為具體的實施方案中，若所述待測牛奶中存在氏菌，則在相應原始拉曼光譜中于2040cm^-1-2300cm^-1有CD峰出現。

在一些較為具體的實施方案中，所述的方法包括：

(1)將一系列不同濃度的沙門氏菌種子液分別加入含重水的培養基中進行培養至對數期，之后于不同時間點分別收集菌體細胞，進行拉曼光譜掃描，對獲得的拉曼光譜進行分析處理，獲得CD/(CD+CH)％-原始沙門氏菌濃度的Log值標準曲線，其中，CD/(CD+CH)％為拉曼光譜中CD峰峰高與CD峰和CH峰峰高之和的比值；

(2)將可能含有沙門氏菌的待測牛奶加入含重水的培養基中進行培養至對數期，之后于不同時間點分別收集菌體細胞，進行拉曼光譜掃描，對獲得的拉曼光譜進行分析處理，并與所述標準曲線對照，從而測得待測牛奶中的沙門氏菌濃度。

在一些較為具體的實施方案中，步驟(2)還包括設置激光拉曼光譜儀的工作參數，所述的工作參數包括激發光的波長、激光功率和掃描時間。

優選的，所述激發光的波長被設置為532nm，激光功率被設置為8mw，掃描時間被設置為10s。

較之現有技術，本發明基于D₂O標記、利用拉曼光譜對牛奶中的沙門氏菌進行快速檢測，具有檢測時間短(4-8h)，靈敏度高、成本低、易于操作、方便快捷等優點，檢出限為10⁴-10⁸cfu/mL，受牛奶樣品中基質的干擾小，是一種理想的沙門氏菌快速檢測方法，具有很好的實際應用前景，適于在食品安全、環境監測等領域廣泛應用。

附圖說明

圖1a-1f分別示出了本發明一典型實施例中沙門氏菌在不同培養基中的生長曲線，及對應的拉曼光譜。

圖2a-圖2c分別示出了本發明一典型實施例中沙門氏菌在50％D₂O制得的培養基中，分別培養4h、6h、8h時，CD/(CD+CH)％與添加菌體濃度的Log值的線性關系曲線圖。

圖3a和圖3b分別示出了本發明一典型實施例待測牛奶中沙門氏菌在50％D₂O制得的培養基中的拉曼光譜圖及CD/(CD+CH)％與添加菌體濃度的Log值的線性關系曲線圖。

具體實施方式