[發明專利]基于重水標記的拉曼光譜快速檢測牛奶中沙門氏菌的方法

在審

• 申請號: 201710680746.5
• 申請日: 2017-08-10
• 公開（公告）號: CN107505306A
• 公開（公告）日: 2017-12-22
• 發明（設計）人: 馮敬敬;謝云飛;姚衛蓉;郭亞輝;成玉梁;錢和
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65
• 代理公司: 南京利豐知識產權代理事務所(特殊普通合伙)32256
• 代理人: 王茹,王鋒

1.一種基于重水標記的拉曼光譜快速檢測牛奶中沙門氏菌的方法，其特征在于包括：將可能含有沙門氏菌的待測牛奶加入含重水的培養基進行培養，之后收集培養后的菌體細胞進行拉曼光譜掃描，并對獲得的原始拉曼光譜進行分析處理，實現對待測牛奶中沙門氏菌的檢測。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：若所述待測牛奶中存在沙門氏菌，則在相應原始拉曼光譜中于2040cm^-1-2300cm^-1有CD峰出現。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于包括：

(1)將一系列不同濃度的沙門氏菌種子液分別加入含重水的培養基中進行培養至對數期，之后于不同時間點分別收集菌體細胞，進行拉曼光譜掃描，對獲得的拉曼光譜進行分析處理，獲得CD/(CD+CH)％-原始沙門氏菌濃度的Log值標準曲線，其中，CD/(CD+CH)％為拉曼光譜中CD峰峰高與CD峰和CH峰峰高之和的比值；

(2)將可能含有沙門氏菌的待測牛奶加入含重水的培養基中進行培養至對數期，之后于不同時間點分別收集菌體細胞，進行拉曼光譜掃描，對獲得的拉曼光譜進行分析處理，并與所述標準曲線對照，從而測得待測牛奶中的沙門氏菌濃度。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟(2)還包括設置激光拉曼光譜儀的工作參數，所述的工作參數包括激發光的波長、激光功率和掃描時間；優選的，所述激發光的波長被設置為532nm，激光功率被設置為8mw，掃描時間被設置為10s。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述培養的溫度為37℃，時間為4-8h。

6.根據權利要求1-5中任一項所述的方法，其特征在于：所述方法對于沙門氏菌的檢出限為10⁴-10⁸cfu/mL。

7.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：在所述標準曲線中CD/(CD+CH)％與原始沙門氏菌濃度的Log值呈線性關系。

8.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟(2)包括：對獲得的拉曼光譜進行分析處理，將所獲CD/(CD+CH)％代入步驟(1)所獲標準曲線，從而計算添加回收率。

9.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述含重水的培養基中重水的含量為0～100wt％，優選為50wt％。

10.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述沙門氏菌種子液的制備方法包括：將沙門氏菌置于滅菌過的超純水培養基中進行活化，培養至對數期后期，獲得所述沙門氏菌種子液。