[發明專利]一種高效提取甘蔗糖制品DNA的試劑盒和方法

有效

• 申請號: 201710679544.9
• 申請日: 2017-08-10
• 公開（公告）號: CN107267502B
• 公開（公告）日: 2020-12-11
• 發明（設計）人: 曾巧英;凌秋平;齊永文;劉睿;吳嘉云;胡斐
• 申請（專利權）人: 廣東省科學院生物工程研究所
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 蘇運貞

本發明公開一種高效提取甘蔗糖制品DNA的試劑盒和方法。該試劑盒包括預處理液、裂解液、DNA沉淀液、結合液、磁珠懸浮液、漂洗液和洗脫液。本發明的方法是先將甘蔗糖制品和預處理液混勻，處理后離心，收集沉淀；沉淀經裂解、去蛋白和DNA沉淀獲得初步提取的DNA，用水溶解DNA；加入結合液和磁珠懸浮液，分離磁珠，磁珠再經過兩次漂洗和洗脫獲得純化的DNA。本發明提供的試劑盒和方法提取獲得的甘蔗糖制品DNA含量和純度較高、且提取過程中不使用酚、氯仿等有毒試劑，對環境和實驗人員不會造成危害。

技術領域

本發明屬于分子生物學技術領域，特別涉及一種高效提取甘蔗糖制品DNA的試劑盒和方法。

背景技術

甘蔗是世界上重要的糖能兼用作物，主要種植與熱帶與亞熱帶地區，以甘蔗加工而得的甘蔗糖制品(白糖，紅糖，原糖等)的貿易涉及全球范圍。近年來，利用轉基因技術進行甘蔗的遺傳改良在世界各國得到廣泛應用，獲得一大批轉基因植株。近期有消息稱，巴西國際生物安全技術委員會已經批準全球首款轉基因甘蔗進入市場。為了保證食品的安全，甘蔗糖制品的轉基因檢測開始受到重視。轉基因檢測的大多數是以PCR為基礎的檢測方法，因此提取高質量的DNA是開展轉基因檢測的基礎。

目前常用的植物基因組DNA提取純化的方法有SDS法、CTAB法和利用介質吸附DNA的方法(柱式法和磁珠法)。甘蔗糖制品是通過蔗莖壓榨獲取蔗汁，然后澄清、煮糖等程序加工而來。由于甘蔗汁中的主要成分是水，DNA含量低，另外加工過程中需要添加石灰、澄清劑等并經過高溫煮糖，這些過程都會造成植物細胞破裂，DNA斷裂、降解，使得糖制品中的DNA含量極少，片段較短。另外，在糖加工過程還會產生多糖、焦糖色素、多酚等雜質，這些在DNA提取過程中很難去除，利用傳統的DNA提取方法和現有的DNA提取試劑盒，獲得的DNA產量和純度都較低，無法滿足下一步試驗的要求。

發明內容

本發明的首要目的在于克服現有技術的缺點與不足，提供一種高效提取甘蔗糖制品DNA的試劑盒。

本發明的另一目的在于提供一種高效提取甘蔗糖制品DNA的方法。

本發明的目的通過下述技術方案實現：一種高效提取甘蔗糖制品DNA的試劑盒，包括：預處理液、裂解液、DNA沉淀液、結合液、磁珠懸浮液；

其中，預處理液為10％～20％(w/v)的PEG8000、25％～50％(v/v)異丙醇、或10％(w/v)的PEG8000加25％(v/v)異丙醇形成的混合液；

裂解液的組成如下：300～800mM NaCl、30～80mM Tris-HCl、30～80mM EDTA、2～4％(w/v)SDS，2～3％(w/v)PVPP或PVP，pH 8.0，溶劑為水；

DNA沉淀液為10％～30％(w/v)的PEG8000；

結合液的組成如下：10％～15％(w/v)的PEG8000、2～6M GITC、30～60mM NaCl、30～60mM Tris-HCl，pH6.4，溶劑為水。

所述的高效提取甘蔗糖制品DNA的試劑盒，還包括漂洗液和洗脫液。

所述的漂洗液用于洗去不與磁珠結合的蛋白，其組成優選如下：50％(v/v)乙醇、0.2M NaCl、10mM EDTA、50mM Tris-HCl、2M GITC，pH7.6，溶劑為水。

所述的洗脫液用于將與磁珠結合的DNA洗脫下來，其組成優選如下：10mM Tris-HCl、1mM EDTA、pH8.0，溶劑為水。

所述的甘蔗糖制品是指由甘蔗汁直接加工生產得到的紅糖、黑糖、原糖、白糖等糖制品。

所述的預處理液優選為10％(w/v)的PEG8000。