[發(fā)明專利]基于馬泰勒蟲裂殖子表面蛋白1的間接ELISA檢測試劑盒制備方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201710676779.2 | 申請日： | 2017-08-09 |
| 公開（公告）號： | CN108627649A | 公開（公告）日： | 2018-10-09 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 巴音查汗·蓋力克;張楊;郭慶勇;宋瑞其;劉世芳;李永暢;王盼舉;聞秀秀;謝小婉;張夢圓 | 申請（專利權(quán)）人： | 新疆農(nóng)業(yè)大學(xué) |
| 主分類號： | G01N33/68 | 分類號： | G01N33/68 |
| 代理公司： | 烏魯木齊新科聯(lián)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 65107 | 代理人： | 祁磊 |
| 地址： | 830052 新疆維吾爾自*** | 國省代碼： | 新疆;65 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 馬泰勒蟲病 泰勒蟲 間接ELISA檢測 裂殖子表面 試劑盒制備 蛋白 流行病學(xué)監(jiān)測 常規(guī)檢測 臨床診斷 試劑盒 檢測 制備 耗時 | ||
1.一種基于馬泰勒蟲裂殖子表面蛋白1的間接ELISA檢測試劑盒制備方法，其特征是：馬泰勒蟲EMA1蛋白的制備：（1）在含100μg/mL氨芐青霉素的50mLLB培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)，測定重組蛋白的表達(dá)情況，在37℃與200rpm/min環(huán)境中誘導(dǎo)5h，加入1.0mMol/L的誘導(dǎo)劑IPTG，通過12%的十二烷基硫酸鈉—聚丙烯酰胺凝膠SDS-PAGE電泳分析蛋白質(zhì)表達(dá)情況；（2）根據(jù)KCl染色切膠純化法收集最佳誘導(dǎo)條件下菌體樣品，菌體樣品處理后進(jìn)行SDS-PAGE電泳，用適量的0.25mol/L的KCl溶液染色后，切下其目的條帶碾碎，加入500μL后PBS經(jīng)渦旋儀混勻，置于-80℃環(huán)境中反復(fù)凍溶3次后12000r/min離心2min，取上清，用紫外分光光度儀測定上清中的蛋白濃度，再置于-20℃環(huán)境中保存?zhèn)溆茫获R泰勒蟲病rELISA檢測方法的建立：（1）取10μl重組蛋白樣品-5μg的蛋白含量進(jìn)行SDS-PAGE電泳后，半干轉(zhuǎn)印于NC膜上；（2）用由0.5%Tween的PBS稀釋而成的5.0%脫脂奶作為相應(yīng)包含質(zhì)量比為1：100的血清與脫脂奶在內(nèi)的封閉液后，給酶標(biāo)板中的每個孔滴加150μl封閉液，再將其置于37℃環(huán)境中封閉1.0h；（3）加入稀釋的一抗-馬泰勒蟲陽性血清后，在37℃環(huán)境中反應(yīng)1.5h；（4）加入由5.0%脫脂奶稀釋而成的包含質(zhì)量配比為1:10000的二抗和脫脂奶在內(nèi)的二抗稀釋液后，置于37℃環(huán)境中溫育1.0h；（5）在NC膜上滴加DAB顯色液，在避光環(huán)境中加入TMD底物溶液后，置于37℃培養(yǎng)箱中孵育反應(yīng)10min，再加入50μL2Mol/L的H2SO4終止反應(yīng)，用酶標(biāo)儀在450nm處測定OD值，判定其結(jié)果。
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