[發(fā)明專利]一種從外周血中高效高純度擴(kuò)增自然殺傷細(xì)胞的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710673718.0
• 申請(qǐng)日: 2017-08-09
• 公開（公告）號(hào): CN107326008B
• 公開（公告）日: 2019-10-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李新峰;周雁冰;汪佳瑩
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海萊馥醫(yī)療科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/0783
• 分類號(hào): C12N5/0783
• 代理公司: 上海泰能知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 31233
• 代理人: 黃志達(dá);魏峯

1.一種從外周血中高效高純度擴(kuò)增自然殺傷細(xì)胞的方法，包括：

采集100～200ml的患者外周血，分離單個(gè)核細(xì)胞，把單個(gè)核細(xì)胞放入被CD16單抗和CD226單抗包被過的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，同時(shí)用IFN-γ激活細(xì)胞；激活24小時(shí)以后，培養(yǎng)基中加入IL-2、IL-15、IL-21、OK432、CD2單抗和滅活的自體血清；隨后把細(xì)胞轉(zhuǎn)移到?jīng)]有被CD16單抗和CD226單抗包被過的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，每2-3天給細(xì)胞補(bǔ)液一次；最后把細(xì)胞轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)袋中培養(yǎng)，一共培養(yǎng)21天以后，收集NK細(xì)胞即可；其中，CD16單抗的濃度為2μg/ml，CD226單抗的濃度為1μg/ml；IFN-γ的濃度為1000U/ml；滅活自體血清的濃度為5％、OK432的濃度為1μg/ml、IL-2的濃度為1000U/ml、IL-15的濃度為100U/ml、IL-21的濃度為30ng/ml、CD2單抗的濃度為100ng/ml；所述補(bǔ)液僅添加IL-2、IL-15、IL-21和滅活的自體血清。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從外周血中高效高純度擴(kuò)增自然殺傷細(xì)胞的方法，其特征在于：所述CD16單抗的工作濃度為100～200ng/ml，包被溫度為4℃，包被時(shí)間為8～16小時(shí)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從外周血中高效高純度擴(kuò)增自然殺傷細(xì)胞的方法，其特征在于：所述CD226單抗的工作濃度為100～200ng/ml，包被溫度為4℃，包被時(shí)間為8～16小時(shí)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從外周血中高效高純度擴(kuò)增自然殺傷細(xì)胞的方法，其特征在于：所述培養(yǎng)基為X-VIVO15無血清培養(yǎng)基。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從外周血中高效高純度擴(kuò)增自然殺傷細(xì)胞的方法，其特征在于：培養(yǎng)基中加入IL-2、IL-15、IL-21、OK432、CD2單抗和滅活的自體血清連續(xù)培養(yǎng)三天以后，把細(xì)胞轉(zhuǎn)移到?jīng)]有被抗體包被過的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從外周血中高效高純度擴(kuò)增自然殺傷細(xì)胞的方法，其特征在于：細(xì)胞的培養(yǎng)體積達(dá)到500毫升以上時(shí)，把細(xì)胞轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)袋培養(yǎng)。