[發(fā)明專利]用于鑒定桉樹無(wú)性系的STR引物及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710671363.1
• 申請(qǐng)日: 2017-08-08
• 公開（公告）號(hào): CN107385052B
• 公開（公告）日: 2020-10-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周長(zhǎng)品;李昌榮;李發(fā)根;翁啟杰;陳升侃;王莉;甘四明
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院熱帶林業(yè)研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 廣州科粵專利商標(biāo)代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星

1.用于鑒定桉樹無(wú)性系的STR引物在鑒定桉樹無(wú)性系中的應(yīng)用，其特征在于，包括以下步驟：

a. 提取待測(cè)桉樹DNA；

b. 以步驟a提取的桉樹DNA為模板，以用于鑒定桉樹無(wú)性系的STR引物進(jìn)行多重PCR擴(kuò)增，得到PCR產(chǎn)物；

所述的用于鑒定桉樹無(wú)性系的STR引物，包括以下8對(duì)引物：

EUCeSSR0475引物：其正向引物如SEQ ID NO.1所示，其反向引物如SEQ ID NO.2所示；

EUCeSSR0204引物：其正向引物如SEQ ID NO.3所示，其反向引物如SEQ ID NO.4所示；

EUCeSSR419引物：其正向引物如SEQ ID NO.5所示，其反向引物如SEQ ID NO.6所示；

EUCeSSR1128引物：其正向引物如SEQ ID NO.7所示，其反向引物如SEQ ID NO.8所示；

EUCeSSR298引物：其正向引物如SEQ ID NO.9所示，其反向引物如SEQ ID NO.10所示；

EUCeSSR0176引物：其正向引物如SEQ ID NO.11所示，其反向引物如SEQ ID NO.12所示；

EUCeSSR181引物：其正向引物如SEQ ID NO.13所示，其反向引物如SEQ ID NO.14所示；

EUCeSSR304引物：其正向引物如SEQ ID NO.15所示，其反向引物如SEQ ID NO.16所示；

熒光物質(zhì)加在正向引物的5'端，EUCeSSR0475引物對(duì)、EUCeSSR0204引物對(duì)、EUCeSSR419引物對(duì)、EUCeSSR1128引物對(duì)、EUCeSSR298引物對(duì)、EUCeSSR0176引物對(duì)、EUCeSSR181引物對(duì)、EUCeSSR304引物對(duì)標(biāo)記的熒光物質(zhì)依次分別是ROX、6-FAM、TAMRA、ROX、TAMRA、6-FAM、HEX、ROX；

所述的多重PCR擴(kuò)增，其反應(yīng)體系為：2x Type-it Multiplex PCR Master Mix 5 μL，RNase-Free Water 1 μL，Primers 2 μL，30 ng/μL的 Template DNA 2 μL；其中Primers包含的各引物在反應(yīng)體系中的終濃度為：EUCeSSR0475的正向、反向引物各為0.17 μM，EUCeSSR0204的正向、反向引物各為0.05 μM，EUCeSSR419的正向、反向引物各為0.15 μM，EUCeSSR1128的正向、反向引物各為0.33 μM，EUCeSSR298的正向、反向引物各為0.19 μM，EUCeSSR0176的正向、反向引物各為0.06 μM，EUCeSSR181的正向、反向引物各為0.17 μM，EUCeSSR304的正向、反向引物各為0.87 μM；

所述的多重PCR擴(kuò)增，其反應(yīng)程序?yàn)椋?5 ℃預(yù)變性 5 min ；95 ℃變性 30s、 60 ℃退火 90s、72 ℃延伸 30 s，30 個(gè)循環(huán)；60 ℃延伸30 min；20 ℃保溫；

c. 對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行分型，與桉樹無(wú)性系STR指紋圖譜進(jìn)行比對(duì)，確定待測(cè)桉樹的品種。