[發明專利]耐熱保護劑、豬瘟可室溫保存活疫苗及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201710670177.6
• 申請日: 2017-08-08
• 公開（公告）號: CN107233576B
• 公開（公告）日: 2020-02-07
• 發明（設計）人: 呂芳;盧宇;侯繼波;趙艷紅;鄧碧華;張金秋;張曉燕;左曉昕
• 申請（專利權）人: 江蘇省農業科學院
• 主分類號: A61K47/42
• 分類號: A61K47/42;A61K47/26;A61K47/10;A61K47/18;A61K39/187;A61P31/14
• 代理公司: 32204 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙)
• 代理人: 王艷

本發明公開了耐熱保護劑，按質量百分含量包括棉子糖1%～5%，麥芽糖5%～10%，蔗糖15%～30%，乳糖1%～5%，葡萄糖1%～5%，聚山梨酯80 0.1%～1.5%，聚乙二醇8000 0.1%～0.5%，酪氨酸0.5%～3%，絲素蛋白3%～6%，其余為注射用水。本發明還公開了耐熱保護劑的制備方法。本發明還公開了豬瘟可室溫保存活疫苗及其制備方法，將耐熱保護劑與豬瘟活病毒液混合后，經過梯度真空干燥得到豬瘟活疫苗。本發明制備的疫苗外觀為致密的干燥泡沫狀，掃描電鏡下呈現出玻璃樣片層結構，其玻璃化轉變溫度高達50℃以上，比常規凍干疫苗高30℃，可在37℃保存3個月，25℃保存一年。

技術領域

本發明屬于疫苗制造保存領域，具體涉及耐熱保護劑、豬瘟可室溫保存活疫苗及其制備方法和應用，尤其涉及一種豬瘟可室溫保存活疫苗及其制備方法。

背景技術

豬瘟(classical swine fever，CSF)是由黃病毒科瘟病毒屬的豬瘟病毒(Classical Swine Fever Virus，CSFV)引起的一種急性、熱性和高度接觸性傳染病，流行性廣、病死率高，給養豬業造成巨大的安全隱患和經濟損失。目前市場上用以預防豬瘟效果較好的是豬瘟細胞活疫苗和豬瘟成兔組織脾淋苗，均是以C株為基礎。

豬瘟病毒對熱非常敏感，有文獻報道，豬瘟病毒在37℃中半衰期僅有3小時；目前常用的豬瘟活疫苗主要采用冷凍干燥工藝制備，市場上常用的凍干保護劑組方簡單，大多含有蔗糖、明膠、硫脲、牛血清白蛋白、水解乳蛋白、磷酸鹽等成分，疫苗耐熱性能有限，僅能在37℃保存7-10天，或-15℃長期保存，或2～8℃保存1-2年，一旦冷鏈斷裂，常溫條件下僅幾個小時就會使產品效價損失50％以上，甚至完全失效；同時，由于在冷凍過程中形成的冰晶對病毒囊膜或細胞壁造成不同程度的機械性損傷，會大大降低病毒活性。因此，減少疫苗干燥損失、提高疫苗耐熱性能以保證疫苗品質，是充分發揮免疫效力的重要關鍵技術。近年來，很多研究者都在研究、改進耐熱工藝，例如噴霧干燥、仿生礦化等，但都處于實驗室研究水平。

糖玻璃疫苗技術可以將疫苗制備成玻璃態，該技術主要通過梯度真空干燥工藝得以實現，在真空梯度降低過程中，包含疫苗的高黏度糖通過沸騰、起泡、水分揮發，逐步固相化成為一種玻璃體，由于非還原糖很穩定，因此包裹疫苗的糖玻璃不會與蛋白質產生反應。此技術不需冷凍、在常溫中即可進行，避免了傳統凍干中“冷凍”產生的冰晶對病毒的機械性損傷，此外，由于疫苗含糖量較高、粘度較大，形成的玻璃態疫苗具有更高的玻璃化轉變溫度，可以在室溫或“冷鏈”環境以外進行長期保存。

玻璃化轉變溫度Tg(Glass transition temperature)是物質的重要特性熱參數，是物質從玻璃態轉變為高彈態的溫度。在Tg以下，高聚物處于玻璃態，分子鏈和鏈段都不能運動，只是構成分子的原子(或基團)在其平衡位置作振動；而在Tg時分子鏈雖不能移動，但是鏈段開始運動，表現出高彈性質，溫度再升高，就使整個分子鏈運動而表現出粘流性質。對于干燥的疫苗而言，Tg越高，Tg與儲存溫度的差值越大，越有利于疫苗的長期儲存。

基于以上原理，在對疫苗進行梯度真空干燥前需要加入增稠劑增加疫苗的黏度，同時真空度下降速率不能太快，以保證在干燥過程中可以起泡且樣品不噴瓶。需要注意的是，糖玻璃疫苗的殘余水分不能太高，控制在1-3％為宜，在此殘水情況下，疫苗可以較好地保持玻璃態且穩定。

發明內容

發明目的：本發明所要解決的技術問題是提供了一種耐熱保護劑。

本發明還要解決的技術問題是提供了一種耐熱保護劑的制備方法。

本發明還要解決的技術問題是提供了耐熱保護劑在制備疫苗方面的應用。

本發明還要解決的技術問題是提供了耐熱保護劑在制備豬瘟可室溫保存活疫苗方面的應用。

本發明最后要解決的技術問題是提供了豬瘟可室溫保存活疫苗的制備方法。