[發明專利]一種利用色譜-3和動態軸向壓縮柱色譜法純化制備高純度鵝去氧膽酸的方法

有效

• 申請號: 201710669145.4
• 申請日: 2017-08-08
• 公開（公告）號: CN107573396B
• 公開（公告）日: 2020-04-21
• 發明（設計）人: 張建超;尤朋濤
• 申請（專利權）人: 湖北中醫藥大學
• 主分類號: C07J9/00
• 分類號: C07J9/00
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 喬宇

1.一種利用色譜-3柱色譜和動態軸向壓縮柱色譜兩步法純化制備高純度鵝去氧膽酸的方法，其特征在于：步驟為：

將待純化處理的低含量的CDCA樣品溶液用裝填聚苯乙烯/二乙烯基苯型色譜填料的色譜-3柱色譜分離純化，獲得CDCA粗品，然后將CDCA粗品動態軸向壓縮柱色譜分離純化，獲得高純度CDCA；

其中：所述的色譜-3柱色譜分離純化步驟為：將色譜-3柱預處理，吸附劑即色譜填料裝柱，將待純化的低含量CDCA樣品上樣于色譜-3柱中，用洗脫劑洗脫濃縮，得到CDCA粗品；

所述的動態軸向壓縮柱色譜分離純化步驟為：將動態軸向壓縮柱裝填填料，系統平衡，然后將上述色譜-3柱色譜分離純化后的CDCA粗品配成樣品溶液注入平衡后的動態軸向壓縮柱，洗脫，濃縮獲得CDCA成品。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述色譜分離純化工藝中待純化處理的低含量的CDCA樣品用30％-80％的乙醇將CDCA配成50-90mg/ml的樣品溶液；所述CDCA樣品可選自初級加工的CDCA含量15-20％的鵝去氧膽酸。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述色譜分離純化工藝中將為待分離的CDCA樣品量5-20倍量的色譜-3吸附劑聚苯乙烯/二乙烯基苯型色譜填料采用濕法上柱。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：色譜-3柱采用95％乙醇膨脹24小時；再用水洗至無渾濁；40％乙醇洗脫5–6BV；

所用色譜分離純化工藝中色譜-3柱柱尺寸為直徑2cm*20cm；

所述的色譜分離純化工藝中的濃縮為：將洗脫收集到的含鵝去氧膽酸單體溶液合并減壓濃縮，至出現大量白色固體，抽濾，干燥，即得鵝去氧膽酸成品。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述的色譜分離純化工藝中：先用30％-45％乙醇洗脫，去掉雜質，再用47％-60％的乙醇洗脫，洗脫色譜-3柱上吸附的CDCA樣品，洗脫過程中用硅膠TLC檢測分離情況，當TLC檢測到收集到的樣品基本為CDCA時，開始收集樣品，然后當TLC檢測到鵝去氧膽酸含量極微時，洗脫結束。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述的動態軸向壓縮柱色譜分離純化工藝為：

將200～800目硅膠填料用流動相勻漿得到勻漿液，將勻漿液送入動態軸向壓縮柱，排出流動相后壓實色譜填料，完成動態軸向壓縮柱的裝填；用流動相沖洗裝填后的動態軸向壓縮柱，持續一段時間，直到色譜儀檢測的色譜基線平穩，達到平衡狀態；

將上述色譜-3柱色譜分離純化后的CDCA粗品配成樣品溶液注入平衡后的動態軸向壓縮柱，流動相洗脫，收集樣品，濃縮，得到CDCA粗品；

CDCA粗品樣品溶液的濃度為0.2-0.8g/ml；所述的流動相為石油醚、乙酸乙酯、甲酸按照體積比例9:5:0.6-13:5:0.6組成的混合液。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于：所述的CDCA粗品用流動相溶解超聲后過濾，將濾液用流動相稀釋成樣品溶液。

8.根據權利要求6所述的方法，其特征在于：所述的動態軸向壓縮柱色譜分離純化工藝洗脫過程中用硅膠TLC檢測樣品分離情況，收集含鵝去氧膽酸部分，當TLC檢測到鵝去氧膽酸含量極微時，洗脫結束。

9.根據權利要求6所述的方法，其特征在于：所述的動態軸向壓縮柱尺寸為直徑50cm*250cm；

所述的動態軸向壓縮柱色譜分離純化工藝中濃縮為將洗脫收集到的鵝去氧膽酸單體溶液合并減壓濃縮，至出現大量白色固體，抽濾，干燥，即得鵝去氧膽酸成品。

10.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述第一步色譜分離純化工藝獲得的鵝去氧膽酸粗品純度為70-80％；最后得到的CDCA成品純度大于97％，收率大于90％。