[發明專利]倒地鈴的組織培養快速繁殖方法

有效

• 申請號: 201710662384.7
• 申請日: 2017-08-04
• 公開（公告）號: CN107242137B
• 公開（公告）日: 2019-04-19
• 發明（設計）人: 黃小燕;韋榮昌
• 申請（專利權）人: 黃小燕
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01G7/04;A01N65/12;A01N59/00;A01P1/00
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理事務所(普通合伙) 11369
• 代理人: 靳浩

1.一種倒地鈴的組織培養快速繁殖方法，其特征在于，包括下列步驟：

S1、外植體處理：取倒地鈴種子作為外植體，先用羽衣草浸提液浸泡10～15min，然后用蒸餾水沖洗5～10min，再用質量分數為2％～5％次氯酸鈉溶液浸泡10～15min，再用無菌水沖洗15～20min，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到處理后的外植體；

其中，所述羽衣草浸提液由以下重量份數組分制成：新鮮羽衣草50～60份、新鮮接骨木葉片10～15份、新鮮紅蘭花8～10份、乙醇10～15份以及無菌水300～500份；將上述重量份數的新鮮羽衣草、新鮮接骨木葉片、新鮮紅蘭花搗爛，然后加入上述重量份數的乙醇和無菌水，于30～50KHz頻率下超聲20～25min，超聲溫度控制在30～35℃，然后過濾除去濾渣，取濾液離心處理，再取上層清液，即制得所述羽衣草浸提液；

S2、外植體培養：將S1中處理后的外植體接種到MS外植體培養基中，在溫度為25～28℃、光照強度為800～1000lux、光照時間為8～10h/天的條件下培養20～25天，外植體發芽后得到無菌試管苗；

其中，所述MS外植體培養基含有MS、0.3～0.6mg/L的細胞分裂素、0.3～0.5mg/L的L-硒甲基硒代半胱氨酸、0.1～0.2mg/L維生素C、0.2～0.3mg/L牛磺酸、38g/L蔗糖以及5.6g/L的瓊脂，pH值控制在5.6～6.0；

S3、繁殖培養：將S2中得到的無菌試管苗剪切后置于MS繁殖培養基中，在溫度為22～28℃、光照強度為1000～1200lux、光照時間為9～11h/天的條件下培養25～30天得到試管苗叢生芽；

其中，所述MS繁殖培養基中含有MS、0.4～0.8mg/L的細胞分裂素、0.4～0.6mg/L的L-硒甲基硒代半胱氨酸、0.2～0.3mg/L維生素C、0.3～0.4mg/L牛磺酸、35g/L蔗糖和5.8g/L的瓊脂，pH值控制在5.6～6.0；

S4、壯苗培養：將S3中得到的試管苗叢生芽置于MS壯苗培養基中，在溫度為25～30℃、光照強度為1200～1500lux，光照時間為10～12h/天的條件下培養20～25天，得到壯苗后的叢生芽；

其中，所述MS壯苗培養基含有MS、0.01～0.02mg/L的細胞生長素、0.5～0.8mg/L的L-硒甲基硒代半胱氨酸、1.5～2mg/L活性炭、3.5～4.5mg/L卡那霉素、30g/L蔗糖和6.2g/L的瓊脂，pH值控制在5.6～6.0；

S5、生根培養：將S4中得到的壯苗后的叢生芽置于MS生根培養基中，在溫度為20～30℃、光照強度為1300～1600lux、光照時間為12～14h/天的條件下培養25～35天，得到帶根的完整植株；

其中，所述MS生根培養基含有MS、0.02～0.03mg/L的細胞生長素、0.6～1.0mg/L的L-硒甲基硒代半胱氨酸、2～2.5mg/L活性炭、4.5～5.5mg/L卡那霉素、28g/L蔗糖和6.4g/L的瓊脂，pH值控制在5.6～6.0；

S6、煉苗與移栽：將S5中得到的帶根的完整植株，在溫度為18～25℃、自然通風的室內煉苗5～7天至植株表面角質形成后將苗取出，立即移栽到育苗基質中，在育苗基質繼續生長25～35天后移栽到田地中；

其中，所述育苗基質包括以下重量份數的組分：腐熟鋸末10～15份、腐熟蔗渣8～10份、腐熟菇渣5～8份、腐熟雞糞4～6份、蚯蚓糞1～3份、黑土20～30份、珍珠巖5～8份、草炭5～8份、硝酸鈣1～2份、硝酸鎂0.5～0.8份、磷酸二氫鉀1～2份以及菌肥0.2～0.5份；

S2、S3中的細胞分裂素均為玉米素、N6-異戊烯基腺嘌呤、四氫吡喃芐基腺嘌呤中的任意一種；

S4、S5中的細胞生長素均為萘乙酸、2,4-二氯苯氧乙酸、2-萘氧乙酸中的任意一種。

2.如權利要求1所述的倒地鈴的組織培養快速繁殖方法，其特征在于，S4中MS壯苗培養基中還添加有托瑪琳石粉和遠紅外陶瓷粉，每升MS壯苗培養基中托瑪琳石粉添加量為3.8～4.2g、遠紅外陶瓷粉添加量為2.8～3.4g；所述托瑪琳石粉和遠紅外陶瓷粉在添加前需100～120℃溫度下烘烤30～40min，然后冷卻至室溫，再用質量分數為0.5％的高錳酸鉀溶液浸泡1～1.5h，然后用無菌水沖洗5～10min后進行烘干處理，得到上述添加量的托瑪琳石粉和遠紅外陶瓷粉。