[發(fā)明專利]一種膀胱癌干細(xì)胞鑒定的試劑盒及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710661721.0
• 申請(qǐng)日: 2017-08-04
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109266741B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-09-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊昭;溫廷益;李翀;鄧愛(ài)華;商秀玲;徐銀燕;何璐云
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院微生物研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/6886
• 分類號(hào): C12Q1/6886;G01N33/574
• 代理公司: 北京律和信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11446
• 代理人: 武玉琴;冷文燕

本發(fā)明公開(kāi)了一種鑒定膀胱癌干細(xì)胞的試劑盒，其包括檢測(cè)KMT1A基因表達(dá)的試劑。本發(fā)明還公開(kāi)了篩選或鑒定膀胱癌干細(xì)胞的方法以及檢測(cè)KMT1A基因表達(dá)試劑的應(yīng)用。與正常膀胱干細(xì)胞、正常膀胱非干細(xì)胞和膀胱癌非干細(xì)胞相比，KMT1A基因僅在膀胱癌干細(xì)胞中高表達(dá)，因此上述試劑盒靈敏度高，特異性好，具有良好的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明總地涉及腫瘤分子生物學(xué)領(lǐng)域，具體涉及篩選或鑒定腫瘤干細(xì)胞的試劑盒與方法以及檢測(cè)KMT1A基因表達(dá)試劑的應(yīng)用。

背景技術(shù)

膀胱癌是泌尿系統(tǒng)腫瘤中最常見(jiàn)的惡性腫瘤。在我國(guó)，膀胱癌的發(fā)病率為6.61/10萬(wàn)，在泌尿系統(tǒng)腫瘤中排第一位。膀胱癌發(fā)生的危險(xiǎn)因素主要包括吸煙、芳香胺類致癌物、砒霜、膀胱的慢性感染、電離輻射和非那西汀類藥物的濫用。根據(jù)病理特征，膀胱癌在臨床上分為淺表型(70％)和浸潤(rùn)型(30％)兩大類。極易復(fù)發(fā)是膀胱癌最大的臨床問(wèn)題。

近年來(lái)，腫瘤干細(xì)胞學(xué)說(shuō)受到腫瘤研究者的高度關(guān)注和認(rèn)同。腫瘤干細(xì)胞假說(shuō)認(rèn)為腫瘤中存在著一小部分具有類似干細(xì)胞功能的細(xì)胞，其具有自我更新和可塑性潛能，在腫瘤形成和生長(zhǎng)中起著決定性作用。最新的研究已證明，腫瘤干細(xì)胞存在于乳腺癌、肝癌和白血病等多種癌癥中，其具有極強(qiáng)的致瘤、耐藥和轉(zhuǎn)移能力。現(xiàn)有的治療措施尚無(wú)法針對(duì)腫瘤干細(xì)胞發(fā)揮作用，這可能是導(dǎo)致腫瘤耐藥和復(fù)發(fā)的主要原因。

目前已經(jīng)報(bào)道的膀胱癌干細(xì)胞的標(biāo)志物包括基底層細(xì)胞標(biāo)志物CK5、CK14、CK17、67kD層黏連蛋白受體(67LR)、CD44、CD47和CD90。上述膀胱癌干細(xì)胞的標(biāo)志物，在正常膀胱干細(xì)胞中也高表達(dá)，不是膀胱癌治療的理想靶點(diǎn)。相比較于膀胱癌非干細(xì)胞、正常膀胱干細(xì)胞和正常膀胱非干細(xì)胞，尚無(wú)膀胱癌干細(xì)胞特異的標(biāo)志物。因此，亟需開(kāi)發(fā)和鑒定高特異性的標(biāo)志物用于膀胱癌干細(xì)胞的鑒定。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述問(wèn)題，發(fā)明人利用表達(dá)譜芯片技術(shù)，通過(guò)分析膀胱癌干細(xì)胞和非干細(xì)胞表達(dá)差異的基因，篩選出在人膀胱癌干細(xì)胞和人膀胱癌干細(xì)胞球中顯著高表達(dá)的基因——組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶KMT1A。

KMT1A的轉(zhuǎn)錄區(qū)域位于X染色體，其mRNA全長(zhǎng)1272bp。與膀胱癌非干細(xì)胞、正常膀胱干細(xì)胞和正常膀胱非干細(xì)胞相比，KMT1A的mRNA和蛋白表達(dá)水平僅在膀胱癌干細(xì)胞中顯著高表達(dá)。KMT1A基因的cDNA核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

據(jù)此，本發(fā)明提供了鑒定膀胱癌干細(xì)胞的試劑盒及檢測(cè)KMT1A基因表達(dá)試劑的應(yīng)用。

本發(fā)明的第一方面提供一種鑒定膀胱癌干細(xì)胞的試劑盒，其包括檢測(cè)KMT1A基因表達(dá)試劑。

優(yōu)選地，根據(jù)上述的試劑盒，其中，所述檢測(cè)KMT1A基因表達(dá)試劑為檢測(cè)KMT1AmRNA或KMT1A蛋白的試劑。

更優(yōu)選地，根據(jù)上述的試劑盒，其中，所述檢測(cè)KMT1A mRNA的試劑為Northern-blot檢測(cè)方法用試劑、原位雜交檢測(cè)方法用試劑、表達(dá)譜芯片檢測(cè)方法用試劑或熒光定量PCR檢測(cè)方法用試劑。優(yōu)選地，所述檢測(cè)KMT1A mRNA的試劑包括擴(kuò)增KMT1A mRNA或其反轉(zhuǎn)錄的cDNA的特異性引物對(duì)。更優(yōu)選地，所述擴(kuò)增KMT1A mRNA反轉(zhuǎn)錄的cDNA的特異性引物對(duì)如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。

再優(yōu)選地，根據(jù)上述的試劑盒，其中，所述試劑盒包括如SEQ ID NO.1所示的引物、SEQ ID NO.2所示的引物、PCR反應(yīng)液和標(biāo)記物，所述標(biāo)記物為熒光染料SYBR或探針。優(yōu)選地，所述PCR反應(yīng)液包括dNTP、Mg²⁺、Taq酶和PCR緩沖液，所述熒光染料SYBR為SYBR GreenII，所述探針為TaqMan探針、分子信標(biāo)、雙雜交探針或復(fù)合探針。其中，所述試劑盒還可以包括作為陽(yáng)性對(duì)照的KMT1A DNA模板。