[發明專利]依諾肝素的制備方法

在審

• 申請號: 201710655740.2
• 申請日: 2017-08-03
• 公開（公告）號: CN107586350A
• 公開（公告）日: 2018-01-16
• 發明（設計）人: 劉榜惠
• 申請（專利權）人: 淮安麥德森制藥有限公司
• 主分類號: C08B37/10
• 分類號: C08B37/10
• 代理公司: 淮安市科文知識產權事務所32223
• 代理人: 廖娜

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別涉及一種依諾肝素的制備方法。

背景技術

依諾肝素鈉（Enoxaparin Sodium）為低分子肝素類（low molecular weight heparin，簡稱LMWH）品種之一，具有極強的抗凝因子Ⅹa功能及弱的抗凝血酶、與血小板結合及影響血小板功能的作用。用于深靜脈血栓的防治，預防血液透析時血栓的形成及DIC的治療。

依諾肝素是將來自豬腸黏膜的肝素苯甲基酯進行堿性降解而制得的低分子肝素鈉鹽，主要的制備方法是：肝素鈉溶液加入芐索氯銨，得到肝素的季銨鹽，真空干燥后的肝素季銨鹽在二氯甲烷溶液中與氯化芐酯化，得到肝素芐酯，肝素芐酯在堿性條件下β-消除得到依諾肝素。該方法為法國安萬特公司專利方法，但對依諾肝素的純化脫色精制方法沒有提及，因此在國內外關于依諾肝素的制備差別較大，質量也摻次不齊。目前純化脫色方法主要有活性炭脫色、疏水層析柱、陰離子樹脂交換、雙氧水氧化脫色，或幾種方法的聯合使用等。缺點是：活性炭脫色方法脫色效果有限，疏水層析柱和陰離子樹脂交換柱操作繁雜，脫色效果差，收率低，且對產品分子量分布造成影響；雙氧水氧化雖然脫色效果明顯，但對依諾肝素有降解，影響最終產品質量。

發明內容

發明目的：針對現有技術中存在的問題，本發明提供一種依諾肝素的制備方法，堿解后萃取除雜，然后再進行活性炭脫色，脫色效果好，最終的依諾肝素產品純度較高，對產品分子量無影響，工藝簡便。

技術方案：本發明提供了一種依諾肝素的制備方法，包括下列步驟：（1）成鹽：使用肝素鈉溶液和芐索氯銨溶液制備肝素季銨鹽；（2）酯化：將所述肝素季銨鹽溶于二氯甲烷后，加入氯化芐攪拌酯化生成肝素芐酯；（3）堿解：將所述肝素芐酯在堿性條件下進行堿解反應，然后將反應液調至中性后向其中加入鹽，攪拌均勻得堿解溶液；（4）萃?。菏褂?~2倍所述堿解溶液量的疏水有機溶劑對所述堿解溶液進行萃取2~3次，然后過濾取濾液；（5）純化：向所述濾液中加入3倍甲醇析出沉淀收集得粗品依諾肝素；（6）脫色：將所述粗品依諾肝素溶于水制備成粗品依諾肝素溶液，控制所述粗品依諾肝素溶液的溫度在60~80℃、pH為6.0~7.0，向其中加入活性炭對其進行脫色25~40min，過濾除去所述活性炭，降溫至室溫，加入鹽混合均勻，過濾得濾液，向濾液中加入3倍甲醇析出沉淀，抽濾、洗滌、烘干所述沉淀得精品依諾肝素。

優選地，在所述（1）中，所述肝素鈉溶液由肝素鈉溶于8倍水配制而成，所述芐索氯銨溶液由2~3倍肝素鈉重量的芐索氯銨溶于4倍水配制而成。

進一步地，在所述（1）中，先將所述肝素鈉溶液緩慢加入到所述芐索氯銨溶液中反應生成粗品肝素季銨鹽，然后所述粗品肝素季銨鹽再經過2~3次水洗后濾干，50℃下真空干燥15~18h后得所述肝素季銨鹽。

優選地，在所述（2）中，所述二氯甲烷的體積與所述肝素季銨鹽的重量比為2.5~3.5：1；所述氯化芐的體積與所述肝素季銨鹽的質量比為1~2：1。

優選地，在所述（2）中，攪拌酯化的時間為30h，溫度為40℃。

優選地，在所述攪拌酯化之后的反應液中還加入1~2倍反應體積的含15%無水乙酸鈉的甲醇，抽濾收集沉淀，沉淀再用甲醇抽濾清洗至洗液遇水不變色，將沉淀在50℃下干燥得所述肝素芐酯。

優選地，在所述（3）中，所述堿性條件為0.1N的氫氧化鈉水溶液，所述氫氧化鈉水溶液的體積與所述肝素芐酯的質量比為20~30：1。

優選地，在所述（3）中，所述鹽為氯化鈉，所述氯化鈉與所述反應液之間的質量體積比為10~20%；和/或，在所述（6）中，所述鹽為氯化鈉，所述氯化鈉與所述粗品依諾肝素溶液之間的質量體積比為10~20%；和/或，在所述（6）中，加入的所述活性炭與所述粗品依諾肝素溶液之間的質量體積比為2~3%。

優選地，在所述（3）中，所述堿解反應的時間為60min，溫度為60℃，反應結束后降至室溫，用1mol的鹽酸將所述反應液調至中性。

優選地，所述疏水有機溶劑為二氯甲烷或乙酸乙酯。