[發明專利]一種富GSH-硒多形漢遜酵母的制備方法

有效

• 申請號: 201710653536.7
• 申請日: 2017-08-02
• 公開（公告）號: CN107365716B
• 公開（公告）日: 2020-04-07
• 發明（設計）人: 錢衛東;劉嬋嬋;王婷;沈蘭芳;曾橋
• 申請（專利權）人: 陜西科技大學
• 主分類號: C12N1/16
• 分類號: C12N1/16;C12N1/38;C12R1/78
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 范巍

本發明提供了一種富GSH?硒多形漢遜酵母的制備方法。采用多形漢遜酵母進行發酵，在發酵前期加入亞硒酸鈉，最終亞硒酸鈉轉化率高達97.28％，有機硒得到最大程度富集，得到了富GSH?硒多形漢遜酵母。本發明具有成本低、產量高、易于放大培養等優點。

技術領域

本發明涉及生物發酵技術領域，特別涉及一種多形漢遜酵母(Hansenulapolymorpha，H.polymorpha)同時富集谷胱甘肽和有機硒(富GSH-硒)的方法。

背景技術

硒(Selenium)是人、動物以及植物體必不可少的微量元素之一，它對維持機體正常新陳代謝以及多種疾病的發生均相關。硒在人體以硒蛋白質的形式存在，是構成谷胱甘肽過氧化酶活性的中心，其藥理作用是通過構建谷胱甘肽過氧化酶來發揮抗氧化作用。硒在人體內以共價鍵結合蛋白質，涉及硒蛋氨酸，硒半胱氨酸，人體缺硒會引發心血管病、糖尿病、心功能不全、頭暈目眩和癌癥等40多種疾病。目前，對于補硒的方法大多數是以無機硒的形態補充，但吸收率低，且對人體有一定的毒副作用，而有機硒對人體沒有毒性，所以如何將無機硒轉化為有機硒，使微量元素的利用率提高、毒性降低越來越受到國內外有關學者的關注。

目前，無機硒轉化為有機硒的途徑有動物轉化法、植物自然轉化法、微生物轉化法等。動物轉化法雖然能提高動物肉產品中的含硒量，但轉化率、含量較低；植物轉化法因長期施加硒肥，不僅成本高，而且容易造成環境污染；微生物轉化法具有高吸收、天然安全、培養便利、各種條件易于控制、營養均衡的特點，可以作為將無機硒轉化為有機硒的主要來源。

研究表明，不少微生物具有良好的富硒能力，如酵母同化無機硒后得到的總硒中97％是有機硒，并且有機硒比無機硒生物活性高，天然安全，適合人體吸收。

多形漢遜酵母(Hansenula Polymorpha，H.polymorpha)屬于真菌門、酵母科、漢遜酵母屬，為單細胞低等真核生物，多形漢遜酵母是一種耐熱酵母，最高生長溫度達49℃，最適溫度為37～43℃。并且具有分裂速度快，生存力強，易于高密度發酵培養的優點，能在廉價的合成或半合成培養基上高密度生長。這不僅可以縮短發酵時間，而且降低了對發酵設備的制冷要求，從而極大地減少大規模培養成本和其發酵時受污染的風險。

谷胱甘肽(Glutathione，GSH)是一種由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸組成的活性三肽，幾乎存在于生物體的所有細胞中。由于半胱氨酸上所具有的活性基團巰基可與重金屬、碘乙酸等毒素相結合，使其具有整合解毒作用，即GSH具有廣譜解毒作用；此外，GSH還具有抗氧化作用，達到延緩機體衰老的功效。因此，GSH在醫藥、保健食品和化妝品等行業有著廣泛的應用。

目前，國內GSH的市場需求量日益增多，但我國GSH幾乎完全依賴進口。GSH的生產方法有化學合成法、萃取法、酶法和發酵法。其中，發酵生產GSH因其產量高、生產成本低、易分離、無污染等優點，日益備受國內外學者關注。目前，用于發酵GSH最常用的菌株主要為酵母菌，其中GSH含量較高的為多形漢遜酵母屬。

目前尚未見到發酵生產富GSH-硒酵母的方法報道。主要原因為：酵母富硒通常采用生物轉化方式，由酵母將胞外亞硒酸鈉轉化為胞內的有機硒。但是，對于多形漢遜酵母而言，按照現有的亞硒酸鈉的加入方式以及濃度，會抑制酵母菌體數量增加和胞內GSH合成。

發明內容

本發明的目的在于提供一種富GSH-硒多形漢遜酵母的制備方法，為富GSH-硒生物發酵的工業化生產提供實踐依據。

為了實現上述目的，本發明采用了以下技術方案：

將多形漢遜酵母種子接種于發酵培養基中進行恒溫發酵，恒溫發酵過程中添加終濃度為20μg/mL～30μg/mL的亞硒酸鈉；所述恒溫發酵的條件包括：接種后，于36～37℃及100～120r/min條件下振蕩培養46～50h；所述亞硒酸鈉的加入時間為接種后10～12h。