[發明專利]定量檢測人甲狀旁腺激素的熒光免疫層析試紙及其制備方法

有效

• 申請號: 201710651085.3
• 申請日: 2017-08-02
• 公開（公告）號: CN107255726B
• 公開（公告）日: 2018-09-14
• 發明（設計）人: 范俊;黃飚;戴軍;鄒賢;朱利國;周彬;張玨;張藝;謝敏浩;施龍順
• 申請（專利權）人: 江蘇省原子醫學研究所;無錫市江原實業技貿總公司
• 主分類號: G01N33/78
• 分類號: G01N33/78;G01N33/577;G01N33/574;G01N33/558;G01N33/543
• 代理公司: 常州佰業騰飛專利代理事務所(普通合伙) 32231
• 代理人: 劉娟娟

本發明公開一種通過定量檢測人甲狀旁腺激素(PTH)實現術中判斷甲狀旁腺組織的熒光免疫層析試紙及其制備方法，該試紙通過雙抗體夾心法和熒光免疫層析技術檢測人PTH，所述抗體是利用特定的抗原表位肽制備獲得。本發明能夠快速準確地檢測待測物中的人PTH，操作簡便、快速，檢測范圍寬、特異性高、靈敏度好。

技術領域

本發明屬于免疫檢測領域，具體涉及一種用于定量檢測人甲狀旁腺激素的熒光免疫層析試紙及其制備方法。

背景技術

甲狀腺癌是頭頸部最常見的惡性腫瘤，也是近年來發病率增長速度最快的惡性腫瘤之一，甲狀腺癌已經成為女性第五大常見惡性腫瘤。甲狀腺癌的治療主要以外科手術治療為主，行甲狀腺全切術后應盡快確定甲狀旁腺功能情況，采取針對性措施進行防治甲狀旁腺功能減退。手術時如果意外切除了甲狀旁腺，患者的血鈣濃度會明顯降低，引發手足抽搐，甚至危及生命。文獻報道甲狀腺術后暫時性低鈣血癥的發生率為0.3～86％，永久性的低鈣血癥為0～13％。PTH是由甲狀旁腺主細胞分泌，具有調節和保持血清鈣在正常水平的作用。如何在手術過程中有效避免損傷甲狀旁腺是一大難題。甲狀旁腺術中保護技術包括甲狀旁腺的識別、精細化甲狀旁腺保護操作技術、補救性甲狀旁腺自體移植技術三方面。甲狀旁腺的識別是術中甲狀旁腺保護最關鍵的一步。由于甲狀旁腺體體積小，其周圍有甲狀腺、脂肪、淋巴結、胸腺、肌肉等組織，在術中辨認存在困難。即使有經驗的外科醫生肉眼識別的準確率也只有近70％，甲狀腺術中存在高達9～19％的甲狀旁腺意外切除率。目前冰凍病理仍是鑒別甲狀旁腺的金標準。但這需要切除部分甲狀旁腺組織，術中等待時間長，費用貴，還存在1.3％錯誤率，細針穿刺組織洗脫液的甲狀旁腺激素(PTH)檢測，用于術前和術中鑒別甲狀旁腺的方法，已有文獻報道。多項研究表明甲狀旁腺穿刺組織洗脫液的PTH值明顯高于非甲狀旁腺組織，通過細針穿刺組織洗脫液的PTH檢測在術中鑒別甲狀旁腺組織，操作簡單，敏感性和特異性高，并十分安全。目前PTH的檢測一般是通過電化學發光進行，需大型的檢測設備，檢測時間加上運送時間需半小時以上，如此推廣應用有難度。

免疫層析技術是出現于80年代初期的一種獨特的免疫分析方式，它通常以條狀纖維層析材料為固相，通過毛細作用使樣品溶液在層析條上泳動，并同時使樣品中的待測物與層析材料上針對待測物的受體(如抗體或抗原)發生高特異高親和性的免疫反應，層析過程中免疫復合物被富集或截留在層析材料的一定區域(檢測帶)，通過酶反應或直接運用可目測的標記物(如膠體金)而得到直觀的實驗結果(如顯示出不同的顏色)。而游離標記物則越過檢測帶，達到與結合標記物自動分離之目的。免疫層析技術常見的示蹤標記粒子有膠體金，乳膠，膠體硒、明膠等，其中運用最成功的標記物為膠體金。但是，膠體金免疫層析試紙條存在以下缺陷：

(1)膠體金標記過程是靜電吸附過程，是一種物理吸附，故在液相中穩定性較差，往往造成已標記上的蛋白分子又再次脫落。

(2)檢測結果通過顯示單一的紫紅色條帶來判斷，顏色單一，難以實現多檢和聯檢。

(3)只有當金顆粒集聚到一定量時，人肉眼才能觀察到紫紅的條帶，且該顏色條帶與背景對比度不大，從而限制了檢測靈敏度。

(4)不同的材料基質效應明顯，背景干擾非常大。

(5)檢測靈敏度較低。

(6)無法實現定量檢測。

目前也出現了利用量子點標記快速免疫層析試紙條的檢測方法，但是此方法并不能實現對檢測物的定量檢測。

此外，在檢測PTH水平的免疫測定方法中，尚缺乏能夠在雙抗體夾心測定中可高靈敏、高特異性檢測的組合，尋找更為合適的具有免疫原性的PTH抗原表位肽、制備特異性的PTH抗原及抗體也是需要解決的重點。

發明內容

本發明要解決的技術問題是克服現有技術存在的上述不足，提供一種高靈敏度和高特異性，批內、批間誤差小、操作簡單、成本低的快速檢測PTH的方法。