[發(fā)明專利]定量檢測人甲狀旁腺激素的熒光免疫層析試紙及其制備方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201710651085.3 | 申請日： | 2017-08-02 |
| 公開（公告）號： | CN107255726B | 公開（公告）日： | 2018-09-14 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 范俊;黃飚;戴軍;鄒賢;朱利國;周彬;張玨;張藝;謝敏浩;施龍順 | 申請（專利權(quán)）人： | 江蘇省原子醫(yī)學(xué)研究所;無錫市江原實業(yè)技貿(mào)總公司 |
| 主分類號： | G01N33/78 | 分類號： | G01N33/78;G01N33/577;G01N33/574;G01N33/558;G01N33/543 |
| 代理公司： | 常州佰業(yè)騰飛專利代理事務(wù)所(普通合伙) 32231 | 代理人： | 劉娟娟 |
| 地址： | 214063*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 定量 檢測 甲狀旁腺 激素 熒光 免疫 層析 試紙 及其 制備 方法 | ||
1.一種用于定量檢測待測物中人甲狀旁腺激素(PTH)的熒光免疫層析試紙，其特征在于，該試紙通過雙抗體夾心法和熒光免疫層析技術(shù)檢測人PTH，其中：
所述雙抗體夾心法采用標記有熒光微球的第一PTH單克隆抗體作為檢測抗體，所述第一PTH單克隆抗體利用人PTH抗原表位肽(1)和(2)中的一個作為抗原制備獲得；并且
所述雙抗體夾心法采用第二PTH單克隆抗體作為捕獲抗體，所述第二PTH單克隆抗體利用人PTH抗原表位肽(1)和(2)中的另一個作為抗原制備獲得；
所述人PTH抗原表位肽(1)和(2)分別為：
(1)：ERVEWLRKKLQ(SEQ ID NO：2)
(2)：RKKEDNVLVESHEKSLGEAD(SEQ ID NO：3)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的熒光免疫層析試紙，其特征在于，所述第一PTH單克隆抗體和第二PTH單克隆抗體是由PTH抗原表位肽與載體蛋白偶聯(lián)制備而成的抗原制備而得。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的熒光免疫層析試紙，其特征在于，所述熒光微球上的熒光物質(zhì)為稀土離子銪；所述熒光微球的微球材料為聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯或甲基丙烯酸甲酯的共聚物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的熒光免疫層析試紙，其特征在于，所述試紙具有底板(1)，并且在該底板(1)上沿使用時的層析方向依次以接觸方式設(shè)置有：樣品墊(4)、結(jié)合墊(5)、硝酸纖維素膜(2)、吸水紙(3)，所述結(jié)合墊(5)設(shè)置有所述標記有熒光微球的第一PTH單克隆抗體，所述硝酸纖維素膜(2)包括檢測帶(7)和質(zhì)控帶(6)，所述檢測帶(7)固定有所述第二PTH單克隆抗體，所述質(zhì)控帶(6)包被有能與所述標記有熒光微球的第一PTH單克隆抗體特異性結(jié)合的抗抗體。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的熒光免疫層析試紙，其特征在于，所述底板(1)不具有熒光性質(zhì)。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的熒光免疫層析試紙，其特征在于，所述抗抗體為羊抗鼠IgG多克隆抗體或兔抗鼠IgG多克隆抗體。
7.一種制備根據(jù)權(quán)利要求1至6中任意一項所述的熒光免疫層析試紙的方法，其特征在于，其包括以下步驟：
1)提供標記有熒光微球的第一PTH單克隆抗體；
2)提供結(jié)合墊(5)，其中在所述結(jié)合墊(5)上結(jié)合有所述標記熒光微球的第一PTH單克隆抗體；
3)提供硝酸纖維素膜(2)，其中在所述硝酸纖維素膜(2)上沿使用時的層析方向間隔固定第二PTH單克隆抗體和抗抗體，以分別形成檢測帶(7)和質(zhì)控帶(6)；
4)在底板(1)上沿使用時的層析方向依次以接觸方式設(shè)置樣品墊(4)、所述結(jié)合墊(5)、所述硝酸纖維素膜(2)、吸水紙(3)，從而制成所述熒光免疫層析試紙。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述步驟1)包括：
使用pH7.2-7.6的MES活化緩沖液洗滌熒光微球，加入碳二亞胺(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)，室溫反應(yīng)一定時間，洗滌熒光微球，用0.05M pH7.2-7.6的磷酸鹽緩沖液復(fù)溶后加入標記抗體，室溫反應(yīng)2小時，加入含有10％BSA的0.05M pH7.2-7.6的磷酸鹽緩沖液，室溫反應(yīng)30分鐘，洗滌熒光微球，用含有1％BSA，0.1％Tween-20，0.05M pH7.2-7.6的磷酸鹽緩沖液復(fù)溶至原體積，定量噴涂于結(jié)合墊上，避光35-38℃烘干1小時，加入干燥劑封存?zhèn)溆谩?/p>
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，在所述步驟3)中，所述檢測帶(7)和質(zhì)控帶(6)間隔3mm至8mm，所述第二PTH單克隆抗體和所述抗抗體的包被濃度分別為0.5～2mg/ml。
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