[發明專利]一種二氫硫辛酰胺脫氫酶突變體蛋白及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201710650938.1
• 申請日: 2017-08-02
• 公開（公告）號: CN107267474B
• 公開（公告）日: 2020-06-30
• 發明（設計）人: 陳晶瑜;孟嬌
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;C12N15/53;C12N15/62
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;何葉喧

1.一種蛋白質，為如下(a1)或(a2)：

(a1)將二氫硫辛酰胺脫氫酶進行點突變甲和點突變乙和點突變丙得到的蛋白質；所述點突變甲為將二氫硫辛酰胺脫氫酶第350位氨基酸殘基由I突變為V；所述點突變乙為將二氫硫辛酰胺脫氫酶第351位氨基酸殘基由A突變為V；所述點突變丙為將二氫硫辛酰胺脫氫酶第358位氨基酸殘基由A突變為V；

(a2)在(a1)的N端或/和C端連接標簽得到的融合蛋白質；

所述二氫硫辛酰胺脫氫酶為序列表的序列1所示的蛋白質。

2.編碼權利要求1所述蛋白質的基因。

3.如權利要求2所述的基因，其特征在于：所述基因為將序列表的序列2所示DNA分子進行如下突變得到的DNA分子：第1048-1053位核苷酸由“ATCGCC”突變為了“GTTGTT”，并且，第1072-1074位核苷酸由“GCA”突變為了“GTT”。

4.含有權利要求2或3所述基因的表達盒、重組載體、轉基因細胞系或重組菌。

5.權利要求1所述蛋白質作為二氫硫辛酰胺脫氫酶的應用。

6.一種丙酮酸脫氫酶復合物，其特征在于：用IAA350/351/358VVV突變體蛋白代替了丙酮酸脫氫酶復合物中的二氫硫辛酰胺脫氫酶；所述IAA350/351/358VVV突變體蛋白為權利要求1所述的蛋白質；所述二氫硫辛酰胺脫氫酶為序列表的序列1所示的蛋白質。

7.權利要求6所述丙酮酸脫氫酶復合物作為丙酮酸脫氫酶復合物的應用。

8.一種制備權利要求1所述蛋白質的方法，包括發酵權利要求4中所述的重組菌的步驟。

9.一種解除二氫硫辛酰胺脫氫酶受NADH抑制的方法，包括如下步驟：將二氫硫辛酰胺脫氫酶進行點突變甲和點突變乙和點突變丙；所述點突變甲為將二氫硫辛酰胺脫氫酶第350位氨基酸殘基由I突變為V；所述點突變乙為將二氫硫辛酰胺脫氫酶第351位氨基酸殘基由A突變為V；所述點突變丙為將二氫硫辛酰胺脫氫酶第358位氨基酸殘基由A突變為V；所述二氫硫辛酰胺脫氫酶為序列表的序列1所示的蛋白質。