[發明專利]一種以烏飯樹葉為主料制成培養基培養蛹蟲草的方法

有效

• 申請號: 201710650905.7
• 申請日: 2017-08-02
• 公開（公告）號: CN107484547B
• 公開（公告）日: 2020-09-22
• 發明（設計）人: 岳春;宋興華;黃亞平;薛超輝;李霞;李繼紅;李欣玲;劉尚軍;葛中巧;李書霞;潘勇;茹慶華;楊峰
• 申請（專利權）人: 南陽理工學院
• 主分類號: A01G18/00
• 分類號: A01G18/00;A01G18/20;A01G18/40;C05G3/00;C05G1/00
• 代理公司: 長春市東師專利事務所 22202
• 代理人: 張鐵生;郭小茜

1.一種以烏飯樹葉為主料制成培養基培養蛹蟲草的方法，其特征在于：包括如下步驟：

S1、將烏飯樹葉進行打漿，制成烏飯樹葉漿；

S2、原菌種的馴化：用蛹蟲草菌種作為出發菌種，菌種復壯后，以PDA培養基為母種斜面基礎培養基，添加烏飯樹葉漿，進行菌種的馴化；

S3、斜面菌種的制備：將馴化好的菌種再轉接到添加烏飯樹葉漿后的斜面培養基上，接種量為6％，放在恒溫培養箱中培養，待菌絲布滿整個斜面時從恒溫培養箱中取出；

S4、液體菌種的馴化：將烏飯樹葉漿添加到液體培養基中制成含烏飯樹葉的液體培養基，將馴化好的斜面菌種轉接到液體培養基中進行搖床培養，進行液體菌種的馴化；

S5、液體菌種的培養制備：將馴化好的斜面菌種轉接到添加烏飯樹葉漿后的液體培養基中進行搖床培養，接種量為6％，待形成均勻小球后即可用于栽培；

S6、固體菌種的馴化：將烏飯樹葉漿添加到固體培養基中制成含烏飯樹葉的固體培養基，用接種槍 將液體菌種打入栽培瓶中進行培養，進行固體菌種的馴化；

S7、固體培養基的接種與培養：將培養好的液體菌種接種到添加烏飯樹葉漿后的固體培養基中進行培養栽培，接種量為4～10％；

所述S1中需要打漿的烏飯樹葉含水量為8～14％；

所述S3中恒溫培養箱在對馴化好的菌種進行培養時，加入紫外線照射。

2.如權利要求1所述的以烏飯樹葉為主料制成培養基培養蛹蟲草的方法，其特征在于：所述紫外線照射所采用的紫外線燈功率為20W，所述紫外線燈設置在斜面培養基上方35厘米處，照射時長為3～5分鐘，照射的時間為菌種開始培養后的第12小時。

3.如權利要求1或2所述的以烏飯樹葉為主料制成培養基培養蛹蟲草的方法，其特征在于：所述PDA培養基由如下重量份的材料制成：馬鈴薯150～250份、葡萄糖15～25份、KH2P040.5～1 .5份、瓊脂15～25份、水900～1100份，所述PDA培養基中添加的烏飯樹葉漿占PDA培養基重量的百分比為20～30％。

4.如權利要求3所述的以烏飯樹葉為主料制成培養基培養蛹蟲草的方法，其特征在于：所述斜面培養基由如下重量份的材料制成：葡萄糖15～25份、黃豆8～12份、磷酸二氫鉀2～4份、硫酸鎂0 .3～0 .5份、味精0 .08～0 .12份、食鹽0 .2～0 .4份、維生素B 0 .5～0 .6份、水800～1200份，所述斜面培養基中添加的烏飯樹葉漿占斜面培養基重量的百分比為25～35％。

5.如權利要求4所述的以烏飯樹葉為主料制成培養基培養蛹蟲草的方法，其特征在于：所述固體培養基由如下重量份的材料制成：大米88～96份、葡萄糖1～3份、蛋白胨1～3份、蠶蛹粉2～3份、檸檬酸銨0.2～0 .4份、硫酸鎂0.1～0.3份、維生素0 .01～0.02份；所述斜面培養基中添加的烏飯樹葉漿占斜面培養基重量的百分比為20～30％。

6.如權利要求5所述的以烏飯樹葉為主料制成培養基培養蛹蟲草的方法，其特征在于：

所述S2中原菌種的馴化培養的溫度保持在18～26℃，培養時間為20～28小時；

所述S3中斜面菌種培養的溫度保持在18～26℃，培養時間為5～9天。

7.如權利要求6所述的以烏飯樹葉為主料制成培養基培養蛹蟲草的方法，其特征在于：所述S4中液體菌種的馴化培養的溫度保持在18～26℃，培養時間為24～30小時，搖床培養的振蕩頻率為90～110r/min；

所述S5中液體菌種培養的溫度保持在18～26℃，培養時間為5～8天。

8.如權利要求7所述的以烏飯樹葉為主料制成培養基培養蛹蟲草的方法，其特征在于：所述S6中固體菌種的馴化培養的溫度保持在18～26℃，培養時間為25～30小時；

所述S7中固體培養基接種后培養的溫度保持在18～26℃，培養時間為6～12天。

9.如權利要求8所述的以烏飯樹葉為主料制成培養基培養蛹蟲草的方法，其特征在于：所述S1中需要打漿的烏飯樹葉含水量為11％；

所述PDA培養基由如下重量份的材料制成：馬鈴薯200份、葡萄糖20份、 KH2P04 1份、瓊脂20份、水1000份，所述PDA培養基中添加的烏飯樹葉漿占PDA培養基重量的百分比為26％；

所述斜面培養基由如下重量份的材料制成：葡萄糖20份、黃豆10份、磷酸二氫鉀3份、硫酸鎂0.4份、味精0.1份、食鹽0.3份、維生素B 0.52份、水1000份，所述斜面培養基中添加的烏飯樹葉漿占斜面培養基重量的百分比為31％；

所述固體培養基由如下重量份的材料制成：大米93份、葡萄糖2份、蛋白胨2份、蠶蛹粉2.5份、檸檬酸銨0.3份、硫酸鎂0.2份、維生素0.015份；所述斜面培養基中添加的烏飯樹葉漿占斜面培養基重量的百分比為26％；

所述S2中原菌種的馴化培養的溫度保持在22℃，培養時間為24小時；

所述S3中斜面菌種培養的溫度保持在22℃，培養時間以菌絲布滿整個斜面時為準；

所述S4中液體菌種的馴化培養的溫度保持在22℃，培養時間為27小時，搖床培養的振蕩頻率為100r/min；

所述S5中液體菌種培養的溫度保持在22℃，培養時間以形成均勻小球后為準；

所述S6中固體菌種的馴化培養的溫度保持在22℃，培養時間為28小時；

所述S7中固體培養基接種后培養的溫度保持在22℃，培養時間為9天；

所述S3中恒溫培養箱在對馴化好的菌種進行培養時，加入紫外線照射；

所述紫外線照射所采用的紫外線燈功率為20W，所述紫外線燈設置在斜面培養基上方35厘米處，照射時長為240秒，照射的時間為菌種開始培養后的第12小時。