[發明專利]一種用于染色體異常檢測的文庫構建方法及試劑盒

在審

• 申請號: 201710650277.2
• 申請日: 2017-08-01
• 公開（公告）號: CN107217310A
• 公開（公告）日: 2017-09-29
• 發明（設計）人: 洪燕;白金蕾;玄兆伶;李大為;梁峻彬;陳重建
• 申請（專利權）人: 安諾優達基因科技（北京）有限公司
• 主分類號: C40B50/06
• 分類號: C40B50/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種用于染色體異常檢測的文庫構建方法，該方法包括：

步驟A：提取樣本gDNA，獲得gDNA；

步驟B：將所述gDNA進行酶切處理，純化，獲得酶切產物；

步驟C：將所述酶切產物進行末端修復，純化，得到平末端DNA片段；

步驟D：將所述平末端DNA片段進行3'端加A，得到3'端加A的DNA片段；

步驟E：將所述3'端加A的DNA片段進行加接頭，純化，得到加接頭的DNA片段；

步驟F：將所述加接頭的DNA片段進行PCR擴增，純化，得到擴增產物；

其中，步驟B中所述的酶切處理使用的酶為dsDNA Fragmentase；

步驟C中所述末端修復使用試劑包括：1μL T4 DNA聚合酶，1μL T4多聚核苷酸激酶、5μL 10×多聚核苷酸激酶緩沖液及1μL dNTP；

步驟D中所述3'端加A使用試劑包括：0.5μL Klenow片段(3'-5'exo-)、2.5μL dATP及2.5μL 10×緩沖液；

步驟F中所述PCR擴增的擴增引物包括：

Ann引物序列(SEQ ID NO:1)：

5'-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGAC-3'

Index引物序列(SEQ ID NO:2)：

5'-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATANNNNNNNGTGACTGGAGTTC-3'；

其中，N為隨機堿基。

2.根據權利要求1所述的文庫構建方法，其特征在于，所述步驟A中樣本為羊水、臍血、全血、組織中任意一種。

3.根據權利要求1所述的文庫構建方法，其特征在于，所述步驟B中gDNA的量為8～15ng。

4.根據權利要求1所述的文庫構建方法，其特征在于，所述步驟B的酶切處理的條件為37℃50分鐘。

5.根據權利要求1所述的文庫構建方法，其特征在于，所述步驟C的末端修復的條件為20℃30分鐘。

6.根據權利要求1所述的文庫構建方法，其特征在于，所述步驟D的3'端加A的反應條件為37℃30分鐘。

7.根據權利要求1所述的文庫構建方法，其特征在于，所述步驟F的PCR擴增條件為94℃預變性2分鐘、(94℃變性15秒、62℃退火30秒、72℃延伸30秒)17個循環、72℃延伸10分鐘、4℃保存。

8.一種用于染色體異常檢測的文庫構建試劑盒，其用于實施權利要求1～7中任一項所述的文庫構建方法，其包括：

用于所述酶切處理的試劑；

用于所述末端修復的試劑；

用于所述3'端加A的試劑；

用于所述加接頭的試劑；

用于所述PCR擴增的試劑；

用于所述純化的試劑。