[發明專利]一種檢測DGAT1基因突變的引物及其在牦牛乳品質預測和鑒別方法中的應用

有效

• 申請號: 201710648270.7
• 申請日: 2017-08-01
• 公開（公告）號: CN107447003B
• 公開（公告）日: 2021-02-26
• 發明（設計）人: 胡江;高小莉;劉秀;石斌剛;李少斌
• 申請（專利權）人: 甘肅農業大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京中恒高博知識產權代理有限公司 11249
• 代理人: 姜司晨

本發明公開了一種檢測DGAT1基因突變的PCR?SSCP引物對，所述PCR?SSCP引物對的正向引物的核苷酸序列為序列表中的SEQ ID NO.1，反向引物的核苷酸序列為序列表中的SEQ ID NO.2；并提供了其在牦牛乳品質預測和鑒別中的應用及鑒定方法和相應的試劑盒。本發明的有益效果為：本發明是根據普通牛DGAT1基因“第15內含子?第17外顯子”區序列設計了一對引物，對牦牛基因組DNA進行PCR擴增后進行SSCP分型篩選檢測，通過分析帶型確定牦牛DGAT1基因型和等位基因，通過等位基因序列比對確定SNPs突變，并分析DGAT1基因突變對乳脂率的影響，從而預測該牛的乳脂率高低，其優點是反應靈敏、特異性強、操作簡單、精確度高，可進行快速檢測。

技術領域

本發明涉及分子生物學技術領域，具體涉及一種檢測DGAT1基因突變的PCR-SSCP引物及其在牦牛乳品質預測和鑒別方法中的應用。

背景技術

牦牛分布在青藏高原及其周邊高寒牧區，為當地牧民提供肉、乳和毛絨等高原特色畜產品，是當地重要的生產和生活資源。牦牛乳營養豐富，風味獨特，是加工高原特色乳產品的主要原料乳。牦牛乳中乳脂率、乳蛋白率和總固體物質含量分別為5.45%～7.22%、4.86%～5.40%、16.91%～17.40%，均高于荷斯坦牛乳。

乳脂是乳的重要組成部分，乳脂肪中甘油三酯95%以上，其合成受甘油-3-磷酸酰基轉移酶（GPAT）、1-酰基甘油-3-磷酸酰基轉移酶6（AGPAT6）、磷脂酸磷酸酯酶1（LPIN1）、二酰基甘油酰基轉移酶（DGAT）等作用，其中DGAT是甘油三酯合成最后一步反應的關鍵酶。DGAT基因包括DGAT1 和DGAT2兩種屬于不同基因家族的基因。DGAT1基因屬酰基輔酶A膽固醇酰基轉移酶(acylCoA: cholesterol acyltransferase, ACAT)基因家族，參與脂肪合成、儲存及脂蛋白組裝等過程，是影響乳品質性狀的重要功能候選基因。牛DGAT1基因位于14號染色體，由17個外顯子和16個內含子組成，編碼489個氨基酸。牛DGAT1基因第8外顯子AA→CG的雙堿基突變導致232位的賴氨酸殘基突變為中性疏水性的丙氨酸殘基，命名為K232A 。研究表明，K基因能增加荷斯坦奶牛乳脂率、乳蛋白率及乳脂量，而A基因對提高產乳量和乳蛋白量有作用；DGAT1基因啟動子區及其他區域突變對產乳性狀也有一定影響。另外，DGAT1基因突變也影響肉牛肌內脂肪含量及豬的脂肪沉積和背膘厚。

高乳脂率是牦牛乳的主要特征，近年來對牦牛乳蛋白的分子遺傳報道較多，但對其乳脂性狀的遺傳機制研究較少。

發明內容

本發明的目的就是針對上述現有技術中的缺陷，提供了一種檢測DGAT1基因突變的PCR-SSCP引物及其在牦牛乳品質預測和鑒別方法中的應用。

為了實現上述目的，本發明提供的技術方案為：一種檢測DGAT1基因突變的PCR-SSCP引物對，所述PCR-SSCP引物對的正向引物的核苷酸序列為序列表中的SEQ ID NO.1，反向引物的核苷酸序列為序列表中的SEQ ID NO.2。

本發明的第二個目的是提供了上述PCR-SSCP引物對在檢測DGAT1基因突變中的應用。

本發明的第三個目的是提供了上述PCR-SSCP引物對在牦牛乳品質預測和鑒別中的應用。

本發明的第四個目的是提供了一種用于預示牦牛乳品質的PCR-SSCP檢測試劑盒，所述試劑盒中包括有PCR-SSCP引物對的正向引物、反向引物、牦牛DGAT1*A的DNA標準樣和牦牛DGAT1*B的標準樣，所述PCR-SSCP引物對的正向引物的核苷酸序列為序列表中的SEQID NO.1，反向引物的核苷酸序列為序列表中的SEQ ID NO.2；所述牦牛DGAT1*A的DNA標準樣的核苷酸序列為序列表中的SEQ ID NO.3，牦牛DGAT1*B的DNA標準樣的核苷酸序列為序列表中的SEQ ID NO.4。

本發明的第五個目的是提供了一種牦牛乳品質的鑒別方法，包括以下步驟：