[發明專利]一種檢測DGAT1基因突變的引物及其在牦牛乳品質預測和鑒別方法中的應用

有效

• 申請號: 201710648270.7
• 申請日: 2017-08-01
• 公開（公告）號: CN107447003B
• 公開（公告）日: 2021-02-26
• 發明（設計）人: 胡江;高小莉;劉秀;石斌剛;李少斌
• 申請（專利權）人: 甘肅農業大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京中恒高博知識產權代理有限公司 11249
• 代理人: 姜司晨

1.檢測DGAT1基因的試劑盒在牦牛乳品質預測和鑒別中的應用，所述試劑盒中包括有PCR-SSCP引物對的正向引物、反向引物、牦牛DGAT1*A的DNA標準樣、牦牛DGAT1*B的標準樣和牦牛DGAT1*C的標準樣，所述PCR-SSCP引物對的正向引物的核苷酸序列為序列表中的SEQID NO.1，反向引物的核苷酸序列為序列表中的SEQ ID NO.2；所述牦牛DGAT1*A的DNA標準樣的核苷酸序列為序列表中的SEQ ID NO.3，所述牦牛DGAT1*B的DNA標準樣的核苷酸序列為序列表中的SEQ ID NO.4，所述DGAT1*C的DNA標準樣的核苷酸序列為序列表中的SEQ IDNO.5。

2.一種牦牛乳品質的鑒別方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）采集樣品和提取DNA；

2）待測樣本DNA的PCR擴增，PCR引物對的正向引物的核苷酸序列為序列表中的SEQ IDNO. 1，反向引物的核苷酸序列為序列表中的SEQ ID NO. 2;

3）SSCP電泳檢測，將步驟2)得到的PCR產物進行SSCP電泳，電泳結束后銀染判定基因型，再進行等位基因序列測定；

4）以測定后的等位基因序列進行結果分析，計算等位基因頻率、基因型頻率、純合度、遺傳雜合度和有效等位基因數，同時計算多態信息含量，分析基因突變與胴體及肉品質性狀的相關性。

3.根據權利要求2所述的一種牦牛乳品質的鑒別方法，其特征在于，所述步驟2）中的PCR擴增體系如下：總體積20μL，其中DNA模板0.8μL，正、反向引物各0.8μL，TaKaRa PremixTaq聚合酶10μL，滅菌超純水7.6μL。

4.根據權利要求2所述的一種牦牛乳品質的鑒別方法，其特征在于，所述步驟2）中，PCR擴增時的反應條件為：94℃預變性5min；94℃變性30s，62℃退火30s，72℃延伸30s，共35個循環；最后72℃延伸5min。

5.根據權利要求2所述的一種牦牛乳品質的鑒別方法，其特征在于，所述步驟3）中PCR產物的SSCP電泳檢測過程為：取PCR擴增產物 2μL于滅菌離心管中，加入8μL變性上樣緩沖液，98℃變性10min，迅速冰浴5min后，上樣到12%非變性聚丙烯酰胺凝膠，290V電壓、電泳室溫度19～25℃、電泳槽水循環溫度22℃，進行電泳20h，銀染法顯色后判定基因型。

6.根據權利要求5所述的一種牦牛乳品質的鑒別方法，其特征在于，所述變性上樣緩沖液的組成為：98%的去離子甲酰胺、0.025%的二甲苯氰、0.025 %的溴酚藍、10 mmol/L的EDTA，變性上樣緩沖液的pH值為8.0。

7.根據權利要求5所述的一種牦牛乳品質的鑒別方法，其特征在于，所述的12%非變性聚丙烯酰胺凝膠中，Acr：Bis為37.5：1。