[發明專利]一種腫瘤試劑盒

在審

• 申請號: 201710647826.0
• 申請日: 2017-08-01
• 公開（公告）號: CN107462706A
• 公開（公告）日: 2017-12-12
• 發明（設計）人: 鄧鑫
• 申請（專利權）人: 廣西中醫藥大學附屬瑞康醫院（廣西中西醫結合醫院）
• 主分類號: G01N33/535
• 分類號: G01N33/535;G01N33/577
• 代理公司: 北京天盾知識產權代理有限公司11421
• 代理人: 易曉鈺

技術領域

本發明涉及一種試劑盒，具體是一種腫瘤試劑盒。

背景技術

鈣網蛋白(Calreticulin，CRT)為46KD大小的具有多種生物學功能的內質網分子伴侶蛋白，除了分布在內質網，細胞核、核膜、細胞膜表面以及細胞外基質中均有表達，能發揮多種生化生理效應。在腫瘤發生時，分泌性的CRT在肝癌病人的血清以及膀胱癌患者的尿液中都有上升趨勢，除此之外，對婦科腫瘤如乳腺癌、宮頸癌的研究也顯示相比健康對照CRT的表達量有所增加；用免疫組化染色研究胃癌時發現CRT陽性的患者往往伴有遠處淋巴結的轉移、腫瘤微血管聚集以及五年存活率低下的癥狀。然而，由于腫瘤發生發展的機制至今尚未闡明，因此腫瘤的早期發現也變得越來越重要。在腫瘤的研究和臨床實踐中，早期發現、早期診斷、早期治療是關鍵。腫瘤標志物(TumorMarker，TM)在腫瘤普查、診斷、判斷預后和轉歸、評價治療療效和高危人群隨訪觀察等方面都具有較大的實用價值。隨著單克隆抗體技術的不斷成熟，出現了大量的抗腫瘤標志物的單克隆抗體，并與特異敏感的免疫學檢測技術(RIA、IRMA、ELISA、CLIA、IFA、TRFIA等)相結合，發展了眾多的腫瘤標志物檢測項目并不斷地應用于臨床，已成為腫瘤患者的一個重要檢查指標。基于以上研究結果，本發明將選擇CRT作為腫瘤標志物進行方法學的建立及臨床試驗。本發明應用一對特異性的單抗和多抗建立高敏感性的ELISA試劑盒，用于臨床腫瘤病人及健康對照血清CRT檢測。我們發現，腫瘤病人血清中的CRT水平明顯高于正常對照。

發明內容

本發明的目的在于提供一種腫瘤試劑盒，以解決上述背景技術中提出的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種腫瘤試劑盒，包括腫瘤蛋白P185單克隆抗體、酶標板、陽性對照品、陰性對照品、洗滌液、終止液、鈣網蛋白(CRT)的特異性抗體、辣根過氧化物酶-鏈親和素及其顯色底物，所述的腫瘤蛋白P185單克隆抗體包括包被在酶標板上的腫瘤蛋白P185單克隆抗體和生物素標記的腫瘤蛋白P185單克隆抗體。

作為本發明進一步的方案：所述特異性抗體為通過以鈣網蛋白為免疫原得到的單克隆抗體和/或多克隆抗體。

作為本發明進一步的方案：所述的包被在酶標板上的腫瘤蛋白P185單克隆抗體為腫瘤蛋白P185單克隆抗體2D11，所述的生物素標記的腫瘤蛋白P185單克隆抗體為腫瘤蛋白P185單克隆抗體3F9，腫瘤蛋白P185單克隆抗體2D11、3F9的制備步驟如下：a)以NIH/3T3細胞i.p免疫第一批6～8周的Balb/C雌鼠，得到雌鼠的抗NIH/3T3血清；b)收集長至匯合的T6-17細胞，用PBS緩沖液洗1次，將上述制備的抗NIH/3T3抗血清用PBS緩沖液以1:200稀釋，然后取1ml加入T6-17細胞中，在8℃條件下溫育過夜，期間晃動盛放T6-17細胞的試管5～6次，然后再用PBS緩沖液洗1次，得到懸浮于PBS緩沖液中的T6-17細胞；c)用上述懸浮于PBS緩沖液中的T6-17細胞i.p免疫第二批6-8周的BaLb/C雌鼠，然后取雌鼠的脾細胞制成細胞懸液；d)用ELISA法從上述細胞懸液中篩選出分泌腫瘤蛋白P185單克隆抗體的雜交瘤細胞，并對雜交瘤細胞進行克隆化，從而得到兩株具有穩定分泌腫瘤蛋白P185單克隆抗體能力的雜交瘤細胞株，分別命名為雜交瘤細胞株2D11、雜交瘤細胞株3F9；e)將雜交瘤細胞株2D11、3F9分別注入不同的雌鼠體內，收集腹水，將腹水中的抗體純化，即得腫瘤蛋白P185單克隆抗體2D11、3F9。

作為本發明再進一步的方案：所述的洗滌液是由10g的Na2HPO4·12H2O、50g的NaCl、5g的NaH2PO4·2H2O加入純化水溶解定容至5000ml所得。

與現有技術相比，本發明的有益效果是：本發明能夠簡便、高通量且高靈敏度地檢測人體血清中的腫瘤蛋白P185水平。

具體實施方式

下面對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發明保護的范圍。