[發(fā)明專利]一種高效檢測藍藻細胞周期的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201710646653.0 | 申請日： | 2017-08-01 |
| 公開（公告）號： | CN107287331B | 公開（公告）日： | 2020-06-26 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 鄭正高;董春霞;趙進東 | 申請（專利權(quán)）人： | 北京大學(xué) |
| 主分類號： | C12Q1/6897 | 分類號： | C12Q1/6897;C12N15/74 |
| 代理公司： | 北京萬象新悅知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11360 | 代理人： | 李稚婷 |
| 地址： | 100871*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 高效 檢測 藍藻 細胞周期 方法 | ||
1.一種檢測藍藻細胞周期的方法，包括以下步驟：
1）構(gòu)建含有啟動子驅(qū)動的amiC3基因-熒光蛋白基因的融合片段的整合載體，其中：所述amiC3基因是魚腥藻
2）通過同源雙交換、單交換或穿梭載體將所述啟動子驅(qū)動的amiC3基因-熒光蛋白基因的融合片段整合到藍藻的基因組中；
3）通過熒光顯微鏡觀測每個細胞的熒光顯示的細胞分裂環(huán)狀態(tài)，判斷細胞對應(yīng)的分裂周期。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述熒光蛋白基因為綠色熒光蛋白基因gfp。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述啟動子為amiC3啟動子PamiC3、Cu2+濃度誘導(dǎo)型啟動子PpetE或者藍細菌的強啟動子PcpcBA。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述整合載體上還含有選擇標(biāo)記基因。
5.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述選擇性標(biāo)記基因為抗性基因。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1）構(gòu)建的整合載體上含有魚腥藻PCC7120基因組的兩段同源片段，在兩段同源片段之間插入了包含amiC3啟動子PamiC3-amiC3基因-gfp基因-Em紅霉素抗性基因的整合片段；步驟2）用該整合載體轉(zhuǎn)化野生型魚腥藻PCC7120，得到將所述整合片段整合到魚腥藻PCC7120基因組的all1729和all1730的基因間區(qū)的純合突變株；步驟3）觀測純合突變株每個細胞的綠色熒光顯示的細胞分裂環(huán)的狀態(tài)，從而檢測細胞對應(yīng)的分裂周期。
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