[發(fā)明專利]啟動(dòng)子pYLG及其在構(gòu)建高產(chǎn)長(zhǎng)鏈二元酸的熱帶假絲酵母中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710645497.6
• 申請(qǐng)日: 2017-08-01
• 公開（公告）號(hào): CN107384923B
• 公開（公告）日: 2020-12-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 汪俊卿;修翔;彭健;王瑞明;薛樂;王騰飛;蘇靜;楊曉慧
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 齊魯工業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/113
• 分類號(hào): C12N15/113;C12N15/81;C12N15/65;C12N1/19;C12R1/74
• 代理公司: 濟(jì)南金迪知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37219
• 代理人: 朱家富

本發(fā)明涉及一種啟動(dòng)子pYLG及其在構(gòu)建高產(chǎn)長(zhǎng)鏈二元酸的熱帶假絲酵母中的應(yīng)用。啟動(dòng)子pYLG，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；本發(fā)明還涉及啟動(dòng)子pYLG在構(gòu)建高產(chǎn)長(zhǎng)鏈二元酸的熱帶假絲酵母中的應(yīng)用。本發(fā)明首次公開了一種可以在熱帶假絲酵母中實(shí)現(xiàn)控制熱帶假絲酵母甘油激酶基因GK表達(dá)的啟動(dòng)子pYLG，為構(gòu)建可調(diào)控甘油激酶基因GK的熱帶假絲酵母工程菌奠定了基礎(chǔ)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種啟動(dòng)子pYLG及其在構(gòu)建高產(chǎn)長(zhǎng)鏈二元酸的熱帶假絲酵母中的應(yīng)用，屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

長(zhǎng)鏈二元酸(Long chain dicarboxylic acid)是指碳鏈中含有10個(gè)以上碳原子的脂肪族二羧酸，其通式為HOOC-(CH2)n-COOH(n＝9～16)，是一類用途極其廣泛的重要精細(xì)化工產(chǎn)品。長(zhǎng)鏈二元酸是重要的精細(xì)化工中間體，可以合成人造麝香、共聚酰胺塑料熱熔膠、尼龍工程塑料、高級(jí)尼龍噴麼、高溫電解質(zhì)、高檔服裝熱熔膠、耐寒增塑劑、高級(jí)潤(rùn)滑油、高級(jí)汽車油漆、防紫外線涂料、合成光纜導(dǎo)體等眾多精細(xì)化工產(chǎn)品。二元酸被廣泛應(yīng)用于化工，輕工，國(guó)防、汽車工業(yè)、農(nóng)藥，醫(yī)藥，工程材料，晶體材料等領(lǐng)域。長(zhǎng)鏈二元酸在自然界不存在，目前國(guó)內(nèi)外生產(chǎn)長(zhǎng)鏈二元酸主要有2種方法：化學(xué)法和發(fā)酵法。與微生物發(fā)酵法相比，化學(xué)法生產(chǎn)長(zhǎng)鏈二元酸條件苛刻、工藝復(fù)雜、污染嚴(yán)重，且產(chǎn)品質(zhì)量差，因此眾多研究者將目標(biāo)轉(zhuǎn)向有廣闊發(fā)展前景、工業(yè)價(jià)值大的微生物發(fā)酵上來。

微生物發(fā)酵法是以正構(gòu)烷烴為原料，利用熱帶假絲酵母菌(Candida tropicalis)的氧化性能，在常溫常壓下氧化正構(gòu)烷烴兩端的甲基，生成基質(zhì)烷烴相應(yīng)鏈長(zhǎng)的二元酸。由于長(zhǎng)鏈二元酸的下游產(chǎn)品的開發(fā)潛力廣闊，國(guó)內(nèi)長(zhǎng)鏈二元酸的需求量將不斷增加，其市場(chǎng)潛力極大。

目前，國(guó)內(nèi)已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了熱帶假絲酵母以烷烴為底物生成長(zhǎng)鏈二元酸的發(fā)酵手段，如中國(guó)專利文獻(xiàn)CN103074325A(申請(qǐng)?zhí)?01310045582.0)、中國(guó)專利文獻(xiàn)CN102839133A(申請(qǐng)?zhí)?01110168672X)、中國(guó)專利文獻(xiàn)CN102115766A(申請(qǐng)?zhí)?009102565871)、中國(guó)專利文獻(xiàn)CN102115766B(申請(qǐng)?zhí)?009102565871)、中國(guó)專利文獻(xiàn)CN1614004A(申請(qǐng)?zhí)?00410096698.8)、中國(guó)專利文獻(xiàn)CN103805642A(申請(qǐng)?zhí)?012104397995)、中國(guó)專利文獻(xiàn)CN102115769A(申請(qǐng)?zhí)?009102565907)、中國(guó)專利文獻(xiàn)CN102115765A(申請(qǐng)?zhí)?009102565867)、中國(guó)專利文獻(xiàn)CN1844404A(申請(qǐng)?zhí)?00610038331X)。

但以油脂為底物進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)長(zhǎng)鏈二元酸的研究則較少，如中國(guó)專利文獻(xiàn)CN106754979A(申請(qǐng)?zhí)朇N201611218540.2)、中國(guó)專利文獻(xiàn)CN105154483A(申請(qǐng)?zhí)朇N201510659020.4)和CN105400796A(申請(qǐng)?zhí)朇N201511003830.0)闡述了利用熱帶假絲酵母發(fā)酵油脂產(chǎn)長(zhǎng)鏈二元酸的可行性。而與烷烴發(fā)酵不同的是，以油脂為底物進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)長(zhǎng)鏈二元酸發(fā)酵時(shí)，除會(huì)產(chǎn)生長(zhǎng)鏈二元酸之外，油脂被水解后還有一定量的甘油作為副產(chǎn)物產(chǎn)生，中國(guó)專利文獻(xiàn)CN106636156A(CN201611219248.2)描述了利用改造后的工程菌在產(chǎn)長(zhǎng)鏈二元酸的同時(shí)，將副產(chǎn)物甘油轉(zhuǎn)化為1,3-丙二醇的技術(shù)路線。但上述副產(chǎn)物的生成不僅不利于后續(xù)長(zhǎng)鏈二元酸的分離，而且由于副產(chǎn)物的合成消耗了大量的能量，極大的增加了長(zhǎng)鏈二元酸生產(chǎn)成本。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種啟動(dòng)子pYLG及其在構(gòu)建高產(chǎn)長(zhǎng)鏈二元酸的熱帶假絲酵母中的應(yīng)用。

本發(fā)明技術(shù)方案如下：

一種啟動(dòng)子pYLG，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

上述啟動(dòng)子pYLG在構(gòu)建高產(chǎn)長(zhǎng)鏈二元酸的熱帶假絲酵母中的應(yīng)用。

根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述應(yīng)用，步驟如下：