[發(fā)明專利]環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增結(jié)合側(cè)向流動試紙條法檢測鯉春病毒血癥病毒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710645410.5
• 申請日: 2017-08-01
• 公開（公告）號: CN107267668A
• 公開（公告）日: 2017-10-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 肖勤;劉露;王建梅;李慧欣
• 申請（專利權(quán)）人: 北京科弘生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司11245
• 代理人: 關(guān)暢,何葉喧

1.一種檢測鯉春病毒血癥病毒的環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增成套引物，由上游外引物、下游外引物、上游內(nèi)引物和下游內(nèi)引物組成；

所述上游外引物為如下(a1)或(a2)：

(a1)序列表的序列1所示的單鏈DNA分子；

(a2)將序列1經(jīng)過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列1具有相同功能的DNA分子；

所述下游外引物為如下(b1)或(b2)；

(b1)序列表的序列2所示的單鏈DNA分子；

(b2)將序列2經(jīng)過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列2具有相同功能的DNA分子；

所述上游內(nèi)引物為如下(c1)或(c2)；

(c1)序列表的序列3所示的單鏈DNA分子；

(c2)將序列3經(jīng)過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列3具有相同功能的DNA分子；

所述下游內(nèi)引物為如下(d1)或(d2)；

(d1)序列表的序列4所示的單鏈DNA分子；

(d2)將序列4經(jīng)過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列4具有相同功能的DNA分子。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的成套引物，其特征在于：所述上游內(nèi)引物或所述下游內(nèi)引物的末端采用生物素標(biāo)記。

3.一種檢測鯉春病毒血癥病毒的試劑，由權(quán)利要求1或2所述的成套引物和探針組成；所述探針為如下(e1)或(e2)；

(e1)序列表的序列5所示的單鏈DNA分子；

(e2)將序列5經(jīng)過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列5具有相同功能的DNA分子。

4.一種檢測鯉春病毒血癥病毒的試劑盒，包括權(quán)利要求1或2所述的成套引物或權(quán)利要求3所述的試劑。

5.權(quán)利要求1或2所述的成套引物或權(quán)利要求3所述的試劑或權(quán)利要求4所述的試劑盒在檢測或輔助檢測鯉春病毒血癥病毒中的應(yīng)用；

或，權(quán)利要求1或2所述的成套引物或權(quán)利要求3所述的試劑或權(quán)利要求4所述的試劑盒在制備檢測或輔助檢測鯉春病毒血癥病毒產(chǎn)品中的應(yīng)用；

或，權(quán)利要求1或2所述的成套引物或權(quán)利要求3所述的試劑或權(quán)利要求4所述的試劑盒在檢測或輔助檢測待測樣本是否感染鯉春病毒血癥病毒中的應(yīng)用；

或，權(quán)利要求1或2所述的成套引物或權(quán)利要求3所述的試劑或權(quán)利要求4所述的試劑盒在制備檢測或輔助檢測待測樣本是否感染鯉春病毒血癥病毒產(chǎn)品中的應(yīng)用。

6.一種檢測或輔助檢測待測樣本是否感染鯉春病毒血癥病毒的方法，包括如下步驟：

1)提取待測樣本的總RNA，反轉(zhuǎn)錄為cDNA；以所述cDNA為模板，采用上述的成套引物進(jìn)行環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增，得到環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增產(chǎn)物；

2)用權(quán)利要求3所述的試劑中的所述探針雜交所述環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增產(chǎn)物，得到雜交產(chǎn)物；

3)采用側(cè)向流動試紙條檢測所述雜交產(chǎn)物，若所述試劑條的質(zhì)控帶和檢測帶均顯色，則所述待測樣本感染或候選感染鯉春病毒血癥病毒，若所述試劑條質(zhì)控帶顯色且檢測帶未顯色，則所述待測樣本未感染或候選未感染鯉春病毒血癥病毒。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于：所述雜交的條件63℃雜交5min。

8.一種檢測或輔助檢測待測樣本是否感染鯉春病毒血癥病毒的方法，包括如下步驟：

1)提取待測樣本的總RNA，反轉(zhuǎn)錄為cDNA；以所述cDNA為模板，采用上述的成套引物進(jìn)行環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增，得到環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增產(chǎn)物；

2)電泳檢測所述環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增產(chǎn)物，若含有擴(kuò)增產(chǎn)物，則所述待測樣本感染或候選感染鯉春病毒血癥病毒，若不含有所述擴(kuò)增產(chǎn)物，則所述待測樣本未感染或候選未感染鯉春病毒血癥病毒。

9.根據(jù)權(quán)利要求6至8中任一所述的方法，其特征在于：所述環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增的條件為63℃反應(yīng)40min。