[發明專利]一種皮膚干細胞活性素的制備方法及其應用

有效

• 申請號: 201710643815.5
• 申請日: 2017-07-31
• 公開（公告）號: CN107397710B
• 公開（公告）日: 2021-02-23
• 發明（設計）人: 車七石;劉少輝
• 申請（專利權）人: 廣州潤虹醫藥科技股份有限公司
• 主分類號: A61K8/98
• 分類號: A61K8/98;A61K8/362;A61K8/64;A61K8/66;A61K8/73;A61K8/92;A61K8/99;A61Q19/08;C12N5/0775
• 代理公司: 廣州科沃園專利代理有限公司 44416
• 代理人: 徐翔

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種皮膚干細胞活性素的制備方法及其應用。本發明皮膚干細胞活性素是采用胎盤間充質干細胞經過接種培養、誘導分化以及皮膚干細胞活性素的制備與收集獲得的。本發明的技術優勢在于：采用胰蛋白酶與膠原蛋白酶復配使用用于酶解胎盤組織進而分散組織細胞；皮膚干細胞培養基采用基礎培養基添加一系列功能性組分，有利于胎盤間充質干細胞的誘導分化成為皮膚干細胞以及后續皮膚干細胞的擴增培養；本發明制備的皮膚干細胞活性素應用于霜劑化妝品中能顯著改善皮膚老化、降低不良反應的發生，增加角質層含水量和油脂含量。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種皮膚干細胞活性素的制備方法及其應用。

背景技術

皮膚衰老是由于自然因素或非自然因素造成的皮膚老化現象，皮膚衰老與細胞衰老密切相關，尤其與成纖維細胞和角質形成細胞的衰老緊密聯系。干細胞是一種尚未分化發育的細胞，具有無限自我更新復制能力，且能分化成特定組織，研究表明干細胞的自我復制及多潛能分化還依賴于多種生長因子、細胞因子、活性多肽、蛋白質、生長激素、微量元素等物質，促進自身的擴增及分化的子細胞的增殖。

中國專利CN103202794B公開了一種皮膚干細胞活性素的制備方法及其應用，其中的一個主要發明點是將皮膚干細胞破碎，從細胞內容物中提取活性組分，但皮膚干細胞破碎后，會釋放大量的酶，將皮膚干細胞分泌的生物活性成分降解，降低皮膚干細胞活性素的本質上的功效。

中國專利CN102552099B公開了一種用于皮膚美容修復的復合生物制劑及制備方法，該復核生物制劑含有臍帶血干細胞活性成分和胎盤活性成分，具有促進產婦表皮干細胞的代謝，從而實現美容修復，護膚祛斑的目的，但所述的復合生物制劑是按照常規的護膚品生產方法制備而成的，即將臍帶血干細胞活性物、胎盤活性物按比例與常規化妝品的賦形物混合按照常規的護膚品生產方法制成霜類化妝品等。眾所周知，干細胞美容產品中的活性產品很容易在常溫下失活，要保持它的活性，就必須在特定條件下制備和保存。因此此類干細胞美容產品的效果有待商榷。

發明內容

為解決現有技術中皮膚干細胞粉碎導致生物活性成分降解等問題，本發明提供一種皮膚干細胞活性素的制備方法及其應用。

本發明一種皮膚干細胞活性素的制備方法，包括以下步驟：

S1、胎盤間充質干細胞的分離：取臨床正常剖宮產的新鮮胎盤組織，無菌條件下分離胎盤中部內層組織剪成1cm×1cm×1cm的大小，用400-600u/ml的青霉素浸泡10-30min，用4℃D-Hank’s液沖洗3遍，用胰蛋白酶0.1-0.2g/mL和膠原蛋白酶0.05-0.08g/mL于37℃下消化30-60min，200目過濾網過濾收集組織細胞，紅細胞裂解液4℃水浴3-5min去除紅細胞即得；

S2、胎盤間充質干細胞的接種培養與誘導分化：將步驟S1得到的胎盤間充質干細胞接種在皮膚干細胞培養基中，于37℃、5％CO₂、培養箱中孵育15-25h，棄去培養基，重新加入新鮮的皮膚干細胞培養基中，待皮膚干細胞接近80-90％融合時，進行傳代擴增培養；

S3、皮膚干細胞活性素的制備：將步驟S2中接種在皮膚干細胞培養基中的胎盤間充質干細胞擴增5-10代，收集培養上清液，將上清液用0.22μm的無菌過濾器過濾，合并濾液即得。

優選的，步驟S1所述的皮膚干細胞培養基包括以下組分及其濃度：基礎培養基12-15mL、胰島素15-25mg/L、L-谷氨酰胺2-8mg/L、表皮生長因子6-10μg/L、成纖維細胞生長因子1-3μg/L、神經生長因子0.85-0.9μg/L、糖皮質激素100-250μg/L、檸檬酸鐵銨0.5-1.5mg/L、硝酸鐵0.4-0.6mg/L、EDTA-2Na 4-8mg/L、蝦青素4-6mg/L、黃芩甙元0.08-0.12mg/L、飛燕草素20-50μg/L和桑色素2-4ng/L。