[發(fā)明專利]檢測精液中前列腺特異性抗原的試紙條及其制備方法和應用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710643259.1
• 申請日: 2017-07-31
• 公開（公告）號: CN107271666A
• 公開（公告）日: 2017-10-20
• 發(fā)明（設計）人: 譚有將;陳靜;戴盡波;李家玉;雷志斌;李文超;孫長勇;馬宏聲;曾緒東;黃華春;劉新勝;張愛平
• 申請（專利權）人: 廣東順德工業(yè)設計研究院（廣東順德創(chuàng)新設計研究院）
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558
• 代理公司: 廣州華進聯(lián)合專利商標代理有限公司44224
• 代理人: 葉丹丹

技術領域

本發(fā)明涉及前列腺特異性抗原檢測技術領域，特別是涉及一種檢測精液中前列腺特異性抗原的試紙條及其制備方法和應用。

背景技術

前列腺特異性抗原(Prostate Specific Antigen，PSA)是由前列腺上皮細胞產(chǎn)生的一種蛋白分解酶。PSA主要存在于精液中，其在精漿的濃度約為0.3mg/mL-3mg/mL，遠高于其在血清中的濃度。常用的是通過檢測和分析PSA來實現(xiàn)對精液的鑒定。如法醫(yī)通過檢測和分析精液中的PSA對案件進行判斷和定性。傳統(tǒng)技術采用免疫膠體金方法制備的試劑條來檢測和分析精液中的PSA。但是，該方法制備的試劑條的檢測靈敏度差，準確性低且只能不能進行定量分析。

發(fā)明內(nèi)容

基于此，有必要提供檢測靈敏度好、準確性高且能夠進行定量分析的一種檢測精液中前列腺特異性抗原的試紙條及其制備方法和應用。

一種檢測精液中前列腺特異性抗原的試紙條的制備方法，包括如下步驟：

樣品墊和結(jié)合墊的預處理：將樣品墊和結(jié)合墊均放入預處理液中浸濕，烘干處理后，制得預處理的樣品墊和預處理的結(jié)合墊，其中，所述預處理液的成分包括濃度為1g/L-5g/L的牛血清蛋白、濃度為5g/L-10g/L的海藻糖、濃度為2.5g/mL-10g/L的吐溫20及濃度為0.01mol/L-0.05mol/L且pH值為7-8的磷酸鹽緩沖液；

制備含有彩色微球的結(jié)合墊：將濃度為2mg/mL-4mg/mL的彩色微球標記的前列腺特異性抗原抗體以1μL/cm-2.5μL/cm的量涂布于所述預處理的結(jié)合墊，制得含有彩色微球的結(jié)合墊；

處理硝酸纖維素膜：分別將濃度為1mg/mL-3mg/mL的前列腺特異性抗原抗體、濃度為0.5mg/mL-1mg/mL的前列腺特異性抗原抗體及濃度為1mg/mL-1.5mg/mL的羊抗鼠IgG抗體以一定的間隔涂布于硝酸纖維素膜，以在所述硝酸纖維素膜上形成依次間隔設置的第一檢測帶、第二檢測帶及質(zhì)控帶；

試紙條的組裝：將所述預處理的樣品墊、所述含有彩色微球的結(jié)合墊、已處理的所述硝酸纖維素膜及吸水紙依次粘貼于底板，即得所述檢測精液中前列腺特異性抗原的試紙條。

在其中一個實施例中，所述預處理液的成分包括濃度為3g/L-4g/L的牛血清蛋白、濃度為7g/L-8g/L的海藻糖、濃度為5g/L-8g/L的吐溫20及濃度為0.03mol/L-0.04mol/L的磷酸鹽緩沖液。通過控制預處理液的各成分的濃度范圍，確保樣品墊及結(jié)合墊具備較好的性能，進而提高檢測精液中前列腺特異性抗原的試紙條的精確度。

在其中一個實施例中，所述烘干處理的溫度為30-40℃，時間為4h-6h。

在其中一個實施例中，所述彩色微球的直徑為150nm-300nm。通過控制彩色微球的直徑，確保彩色微球均勻分散，進而提高了制備的試紙條的檢測準確度。

在其中一個實施例中，所述預處理的樣品墊、所述含有彩色微球的結(jié)合墊、已處理的所述硝酸纖維素反應膜及所述吸水紙沿所述底板的長度方向依次粘貼。

在其中一個實施例中，所述含有彩色微球的結(jié)合墊與所述第一檢測帶相臨近，所述吸水紙與所述質(zhì)控帶相臨近。

在其中一個實施例中，所述底板的材料是聚氯乙烯。

本發(fā)明通過將濃度為1mg/mL-3mg/mL的前列腺特異性抗原抗體、濃度為0.5mg/mL-1mg/mL的前列腺特異性抗原抗體及濃度為1mg/mL-1.5mg/mL的羊抗鼠IgG抗體以一定的間隔分別涂布于硝酸纖維素膜，能夠在所述硝酸纖維素膜上形成依次間隔設置的第一檢測帶、第二檢測帶及質(zhì)控帶。該第一檢測帶中前列腺特異性抗原抗體的濃度大于第二檢測帶中前列腺特異性抗原抗體的濃度，進而能夠定量檢測精液中前列腺特異性抗原的濃度。比如當精液中的前列腺特異性抗原的濃度為4ng/ml-200ng/ml時，第一檢測帶及質(zhì)控帶會發(fā)生顏色變化；當精液中的濃度大于200ng/ml時，第一檢測帶、第二檢測帶及質(zhì)控帶均會發(fā)生顏色變化。通過第一檢測帶及第二檢測帶的顏色變化能夠直觀準確地對精液中前列腺特異性抗原的濃度進行定量分析。而且本發(fā)明通過在硝酸纖維素膜依次設置第一檢測帶及第二檢測帶，兩者共同配合減少了精液檢測過程種的誤差，提高了檢測靈敏性及準確性。