[發明專利]一種包含模式識別受體中TLR3配體的納米顆粒載體及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201710641339.3
• 申請日: 2017-07-31
• 公開（公告）號: CN107550885B
• 公開（公告）日: 2021-08-13
• 發明（設計）人: 吳珺;鄒詩;黃順梅;杜艷芹;馬賽厄斯·埃普爾;維多利亞·索科洛娃
• 申請（專利權）人: 華中科技大學同濟醫學院附屬協和醫院
• 主分類號: A61K49/00
• 分類號: A61K49/00
• 代理公司: 武漢河山金堂專利事務所(普通合伙) 42212
• 代理人: 胡清堂

本發明提供了一種包含模式識別受體中TLR3配體的納米顆粒載體CaP/PEI/poly(I:C)/SiO₂?SH，所述化合物包括以磷酸鈣納米顆粒為內核，內核表面接枝有PEI，內核表面吸附載有Poly(I:C)，內核外部為二氧化硅外殼，所述二氧化硅外殼在三甲氧基甲硅烷的作用下使其攜帶硫醇基團而具有功能化，并可攜帶不同熒光染料，如FITC,Cy5等。進一步的，本發明還提供了上述化合物的制備方法以及醫藥用途。本發明的納米顆粒性質穩定，細胞毒性較小，并可攜帶不同熒光染料，可以該納米顆粒為載體，有效實現poly(I:C)與TLR3結合，通過激活TLR3介導的信號通路，增強干擾素和促炎因子的產生，因此有望作為藥物體內成像和疫苗的載體。

技術領域

本發明涉及醫藥技術領域，具體涉及一種包含模式識別受體中TLR3配體的納米顆粒載體及其制備方法和應用。

背景技術

在多種納米顆粒中，磷酸鈣納米顆粒具有高生物相容性、高生物降解性、體積小以及高親和力，可與一些核酸共價功能化等特性，因其有可觀的應用前景。該納米顆粒已被用于各種領域,如轉染、基因沉默、藥物傳輸、光動力治療等。一些大分子物質常常無法穿透細胞膜,因此,一個有效的載體如納米顆粒是必需的。

磷酸鈣納米顆粒的大小約100納米很容易被細胞攝取，隨后溶解在溶酶體中。多項研究證實多殼包裹的磷酸鈣納米顆粒可在免疫學中用途廣泛,例如用于預防性和治療性免疫和特定的B細胞活化。

對許多病毒感染,目前還缺乏有效的預防性或治療性疫苗(如艾滋病毒、乙肝病毒和丙肝病毒感染)。用于預防或治療病毒性疾病的疫苗通常是減毒活疫苗病毒或滅活病原體。理想的疫苗應該提供抗原和佐劑并能保護這些免疫激活生物分子,防止這些分子在達到他們的目標細胞前降解。這意味著疫苗運載系統應該模擬自然病原體的成分和免疫過程。

天然免疫針對的主要靶分子稱為病原相關分子模式(PAMP)，相對應的識別受體稱為模式識別受體(PRR)。PAMP主要指病原體細胞表面的分子或核酸成分，它們在進化中趨于保守，是病原體生存所必須得。來源于病原體的核酸，包括單鏈和雙鏈RNA，是PAMP的其中一大類。TLR是PRR中的一大家族，TLR3位于細胞內，能夠識別病毒的雙鏈RNA。人工合成的雙鏈RNA類似物聚肌胞胞苷酸(poly(I:C))，為TLR3的配體，能夠被TLR3識別并激活TLR3，另外poly(I:C)還能被黑色素瘤分化相關基因5(MDA-5)所識別。

TLR3在胞內識別poly(I:C)并被其激活后，能夠募集下游的銜接蛋白MyD88和TRIF，TLR3可通過MyD88依賴途徑誘導炎癥性細胞因子如IL-1、TNF-α、IL-6和IL-12的表達，參與非特異性抗病毒反應，同時通過MyD88非依賴途徑誘導共刺激分子CD80和CD86以及IFN-β、IP-10等抗病毒性細胞因子的表達，參與誘導DC的分化成熟以及抗病毒免疫反應。胞質的MDA-5可在線粒體外模被線粒體抗病毒信號蛋白(MAVS)所招募。MDA-5雖然與TLR3利用的是不同的銜接蛋白，但下游的信號通路是相同的，都能激活一系列的轉錄因子，包括IRF3,IRF7和NF-κB，誘導抗炎或促炎因子(IL-6,IL-10),I型干擾素(IFN-α/β)以及共刺激分子的表達。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種包含模式識別受體中TLR3配體的納米顆粒載體及其制備方法和醫藥用途。

本發明第一方面提供了一種包含模式識別受體中TLR3配體的納米顆粒載體的制備方法，其特征在于，步驟包括：

S1、制備CaP/PEI：制備PEI-磷酸鈣納米顆粒；

S2、制備CaP/PEI/poly(I:C)：將步驟S1制備得到的PEI-磷酸鈣納米顆粒與水溶的poly(I:C)或含熒光素的poly(I:C)混合，15～35℃下攪拌，得到負載有poly(I:C)的PEI-磷酸鈣納米顆粒；