[發明專利]一種用于檢測肌紅蛋白的測定試劑盒

有效

• 申請號: 201710640575.3
• 申請日: 2017-07-31
• 公開（公告）號: CN107356743B
• 公開（公告）日: 2020-05-15
• 發明（設計）人: 鮑文佳
• 申請（專利權）人: 北京丹大生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/535
• 分類號: G01N33/535;G01N33/543;G01N33/577
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 馬云華

本發明公開了一種用于檢測肌紅蛋白的測定試劑盒，其特征在于，試劑盒包括包被有肌紅蛋白抗體的納米磁微粒、酶標記的肌紅蛋白抗體、肌紅蛋白校準品、化學發光底物，所述納米磁微粒的粒徑為20～40nm，所述酶為辣根過氧化物酶。本發明提供的肌紅蛋白測定試劑盒檢測簡單而快速、抗干擾能力強，同時具有檢測結果準確性和穩定性以及靈敏度高等優點。

技術領域

本發明屬于免疫檢測領域，具體地，涉及一種用于檢測肌紅蛋白的測定試劑盒。

背景技術

肌紅蛋白(Myoglobin)是骨骼肌和心肌特異性氧結合蛋白。分子量為16700，由一條含有153個氨基酸殘基的多肽鏈和一個血紅素輔基構成，呈緊密球形。

由于肌紅蛋白分子量小，當肌細胞受損時，肌紅蛋白會釋放至循環系統中，1～2小時升高，12小時達到峰值，24小時后逐漸下降，是早期診斷急性心肌梗塞等疾病的重要參考指標。

目前肌紅蛋白的免疫檢測方法主要有膠體金免疫層析法、酶聯免疫測定法和化學發光免疫測定法等。膠體金免疫層析法具備操作簡便、快捷、可單份檢測、便于保存、不需要特殊設備等優點，但由于靈敏度不高，難以實現定量等缺點限制了這種方法的使用。酶聯免疫測定法由于具備操作簡單，試劑有效期長，無污染、高于膠體金的敏感性、特異性好、結果可用儀器測定等特點，但由于敏感性相對較低，所用標記酶與底物可定量測定范圍窄及儀器測定范圍窄等缺點，限制了其在微量免疫定量測定中的應用。

化學發光免疫測定法起步于80年代初，快速發展應用于90年代，為當今最為敏感的微量免疫測定法。主要特點是高敏感性、可測定濃度范圍寬、樣品無需稀釋即可檢測、試劑有效期長、操作簡單、檢測自動化程度高、數據自動生成處理能力強、測定儀器兼容性好、無環境污染等，因而得到了迅速發展與應用。但是檢測靈敏度、測值準確度、穩定性、抗干擾能力等方法仍需進一步加強。

發明內容

本發明的目的在于克服現有的化學發光免疫測定法仍然存在檢測靈敏度、準確度、穩定性、抗干擾能力等方面仍然存在問題的缺陷，提供一種新的肌紅蛋白測定試劑盒。

為了實現上述目的，本發明提供一種用于檢測肌紅蛋白的測定試劑盒，其中，試劑盒包括包被有肌紅蛋白抗體的納米磁微粒、酶標記的肌紅蛋白抗體、肌紅蛋白校準品、化學發光底物、緩沖溶液，所述納米磁微粒的粒徑為20～40nm，所述酶為辣根過氧化物酶。

肌紅蛋白校準品可以通過市售獲得，也可以是自行配制；其中包含已知濃度的肌紅蛋白。標準品目的在于繪制一條標準曲線。因此，任何可以覆蓋檢測范圍的校準品濃度都可以使用。肌紅蛋白的濃度例如可以為0、10、50、100、300、800、1500、2000ng/ml等的人肌紅蛋白。

在本發明中，優選情況下，包被有肌紅蛋白抗體的納米磁微粒的制備方法包括：將納米磁微粒與活化劑在緩沖溶液中接觸，然后與肌紅蛋白抗體偶聯得到包被有肌紅蛋白抗體的納米磁微粒，所述活化劑為碳二亞胺。

在本發明中，優選情況下，包被有肌紅蛋白抗體的納米磁微粒的制備方法包括：

1)將納米磁微粒用MES緩沖液分散，使納米磁微粒的濃度為10～30mg/mL；

2)將碳二亞胺加入至步驟1)的溶液中，攪拌加入肌紅蛋白抗體，室溫下攪拌過夜；

3)將納米磁微粒與反應體系分離后用MES緩沖液分散，加入1％BSA封閉液，室溫封閉反應2～4小時，將納米磁微粒分離；

4)將步驟3)分離的納米磁微粒用pH7.4的Tris-HCl緩沖液分散，使納米磁微粒的濃度為5～20mg/mL，得到包被有肌紅蛋白抗體的納米磁微粒。

在本發明中，優選情況下，納米磁微粒的制備方法包括以下步驟：