[發(fā)明專利]一種用于檢測肌紅蛋白的測定試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710640575.3
• 申請日: 2017-07-31
• 公開（公告）號: CN107356743B
• 公開（公告）日: 2020-05-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鮑文佳
• 申請（專利權(quán)）人: 北京丹大生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: G01N33/535
• 分類號: G01N33/535;G01N33/543;G01N33/577
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所 11569
• 代理人: 馬云華

1.一種用于檢測肌紅蛋白的測定試劑盒，其特征在于，試劑盒包括包被有肌紅蛋白抗體的納米磁微粒、酶標(biāo)記的肌紅蛋白抗體、肌紅蛋白校準(zhǔn)品、化學(xué)發(fā)光底物，所述納米磁微粒的粒徑為40nm，所述酶為辣根過氧化物酶；

其中，包被有肌紅蛋白抗體的納米磁微粒的制備方法包括：將納米磁微粒與活化劑在緩沖溶液中接觸，然后與肌紅蛋白抗體偶聯(lián)得到包被有肌紅蛋白抗體的納米磁微粒，所述活化劑為碳二亞胺；

包被有肌紅蛋白抗體的納米磁微粒的制備方法包括：

1）將納米磁微粒用MES 緩沖液分散，使納米磁微粒的終濃度為30mg/mL；

2）將碳二亞胺加入至步驟1）的溶液中，攪拌加入肌紅蛋白抗體，室溫下攪拌過夜；

3）將納米磁微粒與反應(yīng)體系分離后用MES緩沖液分散，加入1％BSA封閉液，室溫封閉反應(yīng)2~4小時(shí)，將納米磁微粒分離；

4）將步驟3）分離的納米磁微粒用pH7.4的Tris-HCl緩沖液分散，使納米磁微粒的終濃度為18mg/mL，得到包被有肌紅蛋白抗體的納米磁微粒；

納米磁微粒的制備方法包括以下步驟：

1）將納米Fe₂O₃粉體分散于體積分?jǐn)?shù)為50%的乙醇水溶液中，機(jī)械攪拌20~30 min，沉淀，分離，固相水洗，加入蒸餾水，調(diào)節(jié) pH至5.5~6，加入油酸，65℃機(jī)械攪拌1小時(shí)，冷卻至室溫，磁分離，無水乙醇、去離子水反復(fù)洗滌除去游離的油酸，干燥得到改性的納米Fe₂O₃磁性粉體；

2）將改性的Fe₂O₃磁性納米粉與聚苯乙烯-聚丙烯酸加入到四氫呋喃中，機(jī)械攪拌的條件下緩慢滴加四氫呋喃1~3倍體積的水，攪拌反應(yīng)2~3小時(shí)，靜置，過濾，石油醚洗滌，干燥得納米磁微粒；

所述酶標(biāo)記的肌紅蛋白抗體的制備方法包括步驟如下：

1）將辣根過氧化物酶溶解于蒸餾水中；

2）向步驟1）得到的溶液中加入0.1M NaIO₄溶液，室溫下避光攪拌，得到混合溶液，并將其裝入透析袋中用醋酸鈉緩沖液透析過夜；

3）向步驟2）得到的透析液中加入碳酸鹽緩沖液至pH值為7.5～8，加入肌紅蛋白抗體，室溫下攪拌反應(yīng)8~10小時(shí)，然后加入NaBH₄溶液，混勻，靜置反應(yīng)，混合液轉(zhuǎn)入透析袋中于PBS 緩沖液中攪拌過夜；

4）取出透析袋中的液體，加入飽和硫酸銨，離心，將沉淀物溶于PBS 緩沖液中并裝入透析袋中透析取上清液即為酶標(biāo)記的肌紅蛋白抗體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肌紅蛋白測定試劑盒，其中，所述化學(xué)發(fā)光底物由化學(xué)發(fā)光液A液和B液組成，A液為含有0.7g/L的魯米諾和0.165g/L的對碘酚的Tris-HCl緩沖液，pH為8.6；B 液為0.675g/L過氧化脲。