[發(fā)明專利]液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用直接檢測(cè)生物組織均勻樣本中氨基酸的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710639232.5
• 申請(qǐng)日: 2017-07-31
• 公開（公告）號(hào): CN107300594B
• 公開（公告）日: 2019-10-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郭娜;雷燕;范斌;閆寒
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京科石知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11595
• 代理人: 朱春野;唐玉剛

本發(fā)明公開了一種液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用直接檢測(cè)生物組織均勻樣本中氨基酸的方法，包括用提取液處理樣本，該提取液由液相色譜的流動(dòng)相組成，包括乙腈和緩沖液，乙腈的濃度為50％?95％，緩沖液由濃度為0.1％?0.3％的甲酸和濃度為1?10mM的甲酸銨組成，或者由濃度為0.1％?0.3％的乙酸和濃度為1?10mM的乙酸銨組成，該提取液的pH在3?5.5之間。本發(fā)明公開的方法可以對(duì)血液、尿及腦脊液等生物組織均勻樣本進(jìn)行直接檢測(cè)，樣本處理方法簡(jiǎn)單，樣本用量少，可低至4μl，檢測(cè)靈敏度高，可達(dá)pg/ml級(jí)，可檢測(cè)的氨基酸濃度范圍寬，基質(zhì)干擾小，檢測(cè)準(zhǔn)確度高，能同時(shí)檢測(cè)的氨基酸種類多達(dá)29種，且檢測(cè)時(shí)間短。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明申請(qǐng)屬于儀器分析領(lǐng)域，具體涉及一種用液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用直接檢測(cè)生物組織均勻樣本中氨基酸的方法。

背景技術(shù)

氨基酸的檢測(cè)分析是生命科學(xué)、食品科學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域的重要研究手段，因此對(duì)氨基酸分析方法的研究與改進(jìn)具有重要的意義。氨基酸分析方法從1958年首先實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化，隨后逐漸發(fā)展，靈敏度、準(zhǔn)確度、自動(dòng)化程度都在逐漸提高。

2008年Boogers等人將UPLC與Accq·tag(Waters公司)在線衍生法聯(lián)用，分析酪蛋白和血清白蛋白中水解的氨基酸。

Accq·tag方法作為目前應(yīng)用廣泛的一種氨基酸分析方法，需要購買試劑包與試劑盒，成本較高，氨基酸需要進(jìn)行衍生化，實(shí)驗(yàn)前的操作相對(duì)繁瑣，且衍生劑只能保存一周，檢測(cè)成本高，易水解的氨基酸無法測(cè)定，能夠檢測(cè)的氨基酸類型受限。

生物組織類型多，不同的生物組織其物理性質(zhì)、化學(xué)組成都不盡相同，相應(yīng)地，其氨基酸組成含量的測(cè)量方法也不盡相同。

發(fā)明內(nèi)容

至少針對(duì)以上所述問題之一，本發(fā)明提供了用液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用直接檢測(cè)生物組織均勻樣本中氨基酸的方法，該方法包括用提取液處理生物組織均勻樣本，所述提取液包括液相色譜的流動(dòng)相。

作為本發(fā)明可選實(shí)施例，提取液可以包括：

乙腈，其濃度為50％-95％；

緩沖液，由濃度為0.1％-0.3％的甲酸和濃度為1-10mM的甲酸銨組成，或者由濃度為 0.1％-0.3％的乙酸和濃度為1-10mM的乙酸銨組成；

所述提取液的pH在3-5.5之間。

作為本發(fā)明公開可選實(shí)施例，提取液的制備方法可以包括：

(a)將乙腈、甲酸或乙酸、甲酸銨或乙酸銨按照100:0.1:0.2的體積比混合，超聲混勻，得到有機(jī)相；

(b)將水和甲酸或乙酸按照100:0.1的體積比混合，超聲混勻，得到水相；

(c)將得到的有機(jī)相和水相，按照5-6:1的體積比混合，超聲混勻，得到提取液。

作為本發(fā)明公開可選實(shí)施例，提取液可以與液相色譜初始流動(dòng)相組成相同。

作為本發(fā)明公開可選實(shí)施例，生物組織均勻樣本可以包括血清、尿或腦脊液。

作為本發(fā)明公開可選實(shí)施例，生物組織均勻樣本的處理方法可以包括：

(i)將樣本放入-80℃冰箱冷凍；

(ii)將冷凍后的樣本，按照樣本與提取液的體積比4：991，加入提取液；

(iii)加入內(nèi)標(biāo)氘代苯丙氨酸，渦旋混合，內(nèi)標(biāo)氘代苯丙氨酸在最終待測(cè)樣本溶液中的體積比為0.5％；

(iv)12000rpm、4℃離心，取上清液，待測(cè)。

進(jìn)一步，作為本發(fā)明公開可選實(shí)施例，提取液的pH可以在4.0-4.8之間。