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[發明專利]液相色譜質譜聯用直接檢測生物組織均勻樣本中氨基酸的方法有效

專利信息
申請號: 201710639232.5 申請日: 2017-07-31
公開(公告)號: CN107300594B 公開(公告)日: 2019-10-15
發明(設計)人: 郭娜;雷燕;范斌;閆寒 申請(專利權)人: 中國中醫科學院醫學實驗中心
主分類號: G01N30/02 分類號: G01N30/02;G01N30/06
代理公司: 北京科石知識產權代理有限公司 11595 代理人: 朱春野;唐玉剛
地址: 100700 北京市東城區東直*** 國省代碼: 北京;11
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摘要:
搜索關鍵詞: 色譜 聯用 直接 檢測 生物 組織 均勻 樣本 氨基酸 方法
【權利要求書】:

1.液相色譜質譜聯用直接檢測生物組織均勻樣本中氨基酸的方法,其特征在于,包括:用提取液處理生物組織均勻樣本;

氨基酸標準品配制;

其中,所述生物組織均勻樣本包括血清、尿和腦脊液;

所述用提取液處理生物組織均勻樣本具體包括:

(i)將樣本放入-80℃冰箱冷凍;

(ii)將冷凍后的樣本4-6μL,按照樣本與提取液的體積比4:991,與提取液混合;

(iii)加入內標氘代苯丙氨酸,渦旋混合,內標氘代苯丙氨酸在最終待測樣本溶液中的體積比為0.5%;

(iv)12000rpm、4℃離心,取上清液,待測;

所述氨基酸標準品配制包括:

(a)血清樣本氨基酸檢測

對L-2-氨基己二酸和葉酸,均用含0.1%甲酸的水溶液配制為100μg·mL-1的標準品母液;

對其余氨基酸,用超純水配制成1mg·mL-1的標準品母液;

用提取液稀釋標準品母液,配制混合標準品;

(b)尿樣本和腦脊液樣本氨基酸檢測

對高半胱氨酸和L-2氨基己二酸,用含0.1%甲酸的水溶液分別配制為100μg·mL-1、1mg·mL-1的標準品母液;

對其余氨基酸,加超純水分別配制成濃度為1mg·mL-1的標準品母液;

用提取液稀釋標準品母液,配制混合標準品;

所述的提取液包括:

乙腈,其濃度為85%;

緩沖液,由濃度為0.1%的甲酸和濃度為1.7mM的甲酸銨組成;

所述提取液的pH為4.32。

2.根據權利要求1所述的方法,還包括以下步驟:

a)對氨基酸標準品進行母子離子對、錐孔電壓和碰撞能量摸索;

b)液相色譜質譜聯用條件和質譜條件優化;

c)求得氨基酸標準曲線;

d)液相色譜質譜聯用檢測生物樣本中氨基酸含量。

3.根據權利要求2所述的方法,其特征在于,所述的液相色譜質譜聯用條件包括:

Waters ACQUITYUPLC系統,包括四元泵溶劑系統,在線脫氣機和自動進樣器;

XEVO TQ-S檢測器,MassLynxTM V4.1質譜工作站軟件;

色譜柱:ACQUITY UPLC BEHAmide,規格:100mm×2.1mm,1.7μm;

流動相A:乙腈,含1mmol·L-1甲酸銨和0.2%甲酸,

B:超純水,含1mmol·L-1甲酸銨和0.1%甲酸;

梯度洗脫:

流速:0.3mL·min-1,柱溫:40℃,進樣量:5μL;

所述的質譜條件包括:

ESI離子源:正離子模式;毛細管電壓:0.4KV;去溶劑溫度:400℃;去溶劑氣流速:800L/Hr;錐孔氣流速:150L/hr;霧化氣壓力:7.0Bar;采用MRM方式進行采集。

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