[發明專利]液相色譜質譜聯用直接檢測生物組織均勻樣本中氨基酸的方法

有效

• 申請號: 201710639232.5
• 申請日: 2017-07-31
• 公開（公告）號: CN107300594B
• 公開（公告）日: 2019-10-15
• 發明（設計）人: 郭娜;雷燕;范斌;閆寒
• 申請（專利權）人: 中國中醫科學院醫學實驗中心
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京科石知識產權代理有限公司 11595
• 代理人: 朱春野;唐玉剛

1.液相色譜質譜聯用直接檢測生物組織均勻樣本中氨基酸的方法，其特征在于，包括：用提取液處理生物組織均勻樣本；

氨基酸標準品配制；

其中，所述生物組織均勻樣本包括血清、尿和腦脊液；

所述用提取液處理生物組織均勻樣本具體包括：

(i)將樣本放入-80℃冰箱冷凍；

(ii)將冷凍后的樣本4-6μL，按照樣本與提取液的體積比4：991，與提取液混合；

(iii)加入內標氘代苯丙氨酸，渦旋混合，內標氘代苯丙氨酸在最終待測樣本溶液中的體積比為0.5％；

(iv)12000rpm、4℃離心，取上清液，待測；

所述氨基酸標準品配制包括：

(a)血清樣本氨基酸檢測

對L-2-氨基己二酸和葉酸，均用含0.1％甲酸的水溶液配制為100μg·mL^-1的標準品母液；

對其余氨基酸，用超純水配制成1mg·mL^-1的標準品母液；

用提取液稀釋標準品母液，配制混合標準品；

(b)尿樣本和腦脊液樣本氨基酸檢測

對高半胱氨酸和L-2氨基己二酸，用含0.1％甲酸的水溶液分別配制為100μg·mL^-1、1mg·mL^-1的標準品母液；

對其余氨基酸，加超純水分別配制成濃度為1mg·mL^-1的標準品母液；

用提取液稀釋標準品母液，配制混合標準品；

所述的提取液包括：

乙腈，其濃度為85％；

緩沖液，由濃度為0.1％的甲酸和濃度為1.7mM的甲酸銨組成；

所述提取液的pH為4.32。

2.根據權利要求1所述的方法，還包括以下步驟：

a)對氨基酸標準品進行母子離子對、錐孔電壓和碰撞能量摸索；

b)液相色譜質譜聯用條件和質譜條件優化；

c)求得氨基酸標準曲線；

d)液相色譜質譜聯用檢測生物樣本中氨基酸含量。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述的液相色譜質譜聯用條件包括：

Waters ACQUITYUPLC系統，包括四元泵溶劑系統，在線脫氣機和自動進樣器；

XEVO TQ-S檢測器，MassLynxTM V4.1質譜工作站軟件；

色譜柱：ACQUITY UPLC BEHAmide，規格：100mm×2.1mm，1.7μm；

流動相A：乙腈，含1mmol·L^-1甲酸銨和0.2％甲酸，

B：超純水，含1mmol·L^-1甲酸銨和0.1％甲酸；

梯度洗脫：

流速：0.3mL·min^-1，柱溫：40℃，進樣量：5μL；

所述的質譜條件包括：

ESI離子源：正離子模式；毛細管電壓：0.4KV；去溶劑溫度：400℃；去溶劑氣流速：800L/Hr；錐孔氣流速：150L/hr；霧化氣壓力：7.0Bar；采用MRM方式進行采集。