[發(fā)明專利]液相色譜質譜聯(lián)用直接檢測生物組織非均勻樣本中氨基酸的方法

有效

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• 申請日: 2017-07-31
• 公開（公告）號: CN107192783B
• 公開（公告）日: 2019-10-15
• 發(fā)明（設計）人: 郭娜;范斌;雷燕;閆寒
• 申請（專利權）人: 中國中醫(yī)科學院醫(yī)學實驗中心
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京科石知識產(chǎn)權代理有限公司 11595
• 代理人: 朱春野;唐玉剛

本發(fā)明公開了一種液相色譜質譜聯(lián)用直接檢測生物組織非均勻樣本中氨基酸的方法，包括用提取液處理樣本，所述提取液由液相色譜的流動相組成，包括乙腈和緩沖液，乙腈的濃度為50％?95％，緩沖液由濃度為0.1％?0.3％的甲酸和濃度為1?10mM的甲酸銨組成，或者由濃度為0.1％?0.3％的乙酸和濃度為1?10mM的乙酸銨組成，提取液的pH在3?5.5之間。本發(fā)明公開的方法可以對心肌組織、大腦皮層及海馬組織等生物組織非均勻樣本進行直接檢測，處理方法簡單，樣本用量少，可低至4μl，檢測靈敏度高，可達pg/ml級，可檢測的氨基酸濃度范圍寬，基質干擾小，檢測準確度高，能同時檢測的氨基酸種類多達29種，且檢測時間短。

技術領域

本發(fā)明申請屬于儀器分析領域，具體涉及一種用液相色譜質譜聯(lián)用直接檢測生物組織非均勻樣本中氨基酸的方法。

背景技術

氨基酸的檢測分析是生命科學、食品科學、臨床醫(yī)學等領域的重要研究手段，因此對氨基酸分析方法的研究與改進具有重要的意義。氨基酸分析方法從1958年首先實現(xiàn)自動化，隨后逐漸發(fā)展，靈敏度、準確度、自動化程度都在逐漸提高。

2008年Boogers等人將UPLC與Accq·tag(Waters公司)在線衍生法聯(lián)用，分析酪蛋白和血清白蛋白中水解的氨基酸。

Accq·tag方法作為目前應用廣泛的一種氨基酸分析方法，需要購買試劑包與試劑盒，成本較高，氨基酸需要進行衍生化，實驗前的操作相對繁瑣，且衍生劑只能保存一周，易水解的氨基酸無法測定，能夠檢測到的氨基酸類型受限。

生物組織類型多，不同的生物組織其物理性質、化學組成都不盡相同，相應地，其氨基酸組成含量的測量方法也不盡相同。

發(fā)明內容

至少針對以上所述問題之一，本發(fā)明提供了用液相色譜質譜聯(lián)用直接檢測生物組織非均勻樣本中氨基酸的方法，該方法包括用提取液處理生物組織非均勻樣本，所述提取液包括液相色譜的流動相。

作為本發(fā)明公開可選實施例，提取液可以包括：

乙腈，其濃度為50％-95％；

緩沖液，由濃度為0.1％-0.3％的甲酸和濃度為1-10mM的甲酸銨組成，或者由濃度為 0.1％-0.3％的乙酸和濃度為1-10mM的乙酸銨組成；

所述提取液的pH在3-5.5之間。

作為本發(fā)明公開可選實施例，提取液的制備方法可以包括：

(a)將乙腈、甲酸、甲酸銨按照100:0.1:0.2的體積比混合，超聲混勻，得到有機相；

(b)將水和甲酸按照100:0.1的體積比混合，超聲混勻，得到水相；

(c)將得到的有機相和水相，按照5-6:1的體積比混合，超聲混勻，得到提取液。

作為本發(fā)明公開可選實施例，提取液可以與液相色譜初始流動相組成相同。

作為本發(fā)明公開可選實施例，生物組織非均勻樣本可以是心肌組織、大腦皮層組織或海馬組織。

作為本發(fā)明公開可選實施例，生物組織非均勻樣本的處理方法可以包括：

(i)將生物組織用生理鹽水洗凈，擦干，剪碎并混勻；

(ii)稱重，加20％甲醇勻漿，得勻漿液；

(iii)將勻漿液放入-80℃冰箱冷凍；

(iv)將冷凍的勻漿液，按照勻漿液與提取液的體積比4：991，加入提取液；

(v)加入內標氘代苯丙氨酸，渦旋混合，內標氘代苯丙氨酸在最終待測溶液中的體積含量為0.5％；

(vi)12000rpm、4℃離心，取上清液，待測。