[發明專利]液相色譜質譜聯用直接檢測生物組織非均勻樣本中氨基酸的方法

有效

• 申請號: 201710639231.0
• 申請日: 2017-07-31
• 公開（公告）號: CN107192783B
• 公開（公告）日: 2019-10-15
• 發明（設計）人: 郭娜;范斌;雷燕;閆寒
• 申請（專利權）人: 中國中醫科學院醫學實驗中心
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京科石知識產權代理有限公司 11595
• 代理人: 朱春野;唐玉剛

本發明公開了一種液相色譜質譜聯用直接檢測生物組織非均勻樣本中氨基酸的方法，包括用提取液處理樣本，所述提取液由液相色譜的流動相組成，包括乙腈和緩沖液，乙腈的濃度為50％?95％，緩沖液由濃度為0.1％?0.3％的甲酸和濃度為1?10mM的甲酸銨組成，或者由濃度為0.1％?0.3％的乙酸和濃度為1?10mM的乙酸銨組成，提取液的pH在3?5.5之間。本發明公開的方法可以對心肌組織、大腦皮層及海馬組織等生物組織非均勻樣本進行直接檢測，處理方法簡單，樣本用量少，可低至4μl，檢測靈敏度高，可達pg/ml級，可檢測的氨基酸濃度范圍寬，基質干擾小，檢測準確度高，能同時檢測的氨基酸種類多達29種，且檢測時間短。

技術領域

本發明申請屬于儀器分析領域，具體涉及一種用液相色譜質譜聯用直接檢測生物組織非均勻樣本中氨基酸的方法。

背景技術

氨基酸的檢測分析是生命科學、食品科學、臨床醫學等領域的重要研究手段，因此對氨基酸分析方法的研究與改進具有重要的意義。氨基酸分析方法從1958年首先實現自動化，隨后逐漸發展，靈敏度、準確度、自動化程度都在逐漸提高。

2008年Boogers等人將UPLC與Accq·tag(Waters公司)在線衍生法聯用，分析酪蛋白和血清白蛋白中水解的氨基酸。

Accq·tag方法作為目前應用廣泛的一種氨基酸分析方法，需要購買試劑包與試劑盒，成本較高，氨基酸需要進行衍生化，實驗前的操作相對繁瑣，且衍生劑只能保存一周，易水解的氨基酸無法測定，能夠檢測到的氨基酸類型受限。

生物組織類型多，不同的生物組織其物理性質、化學組成都不盡相同，相應地，其氨基酸組成含量的測量方法也不盡相同。

發明內容

至少針對以上所述問題之一，本發明提供了用液相色譜質譜聯用直接檢測生物組織非均勻樣本中氨基酸的方法，該方法包括用提取液處理生物組織非均勻樣本，所述提取液包括液相色譜的流動相。

作為本發明公開可選實施例，提取液可以包括：

乙腈，其濃度為50％-95％；

緩沖液，由濃度為0.1％-0.3％的甲酸和濃度為1-10mM的甲酸銨組成，或者由濃度為 0.1％-0.3％的乙酸和濃度為1-10mM的乙酸銨組成；

所述提取液的pH在3-5.5之間。

作為本發明公開可選實施例，提取液的制備方法可以包括：

(a)將乙腈、甲酸、甲酸銨按照100:0.1:0.2的體積比混合，超聲混勻，得到有機相；

(b)將水和甲酸按照100:0.1的體積比混合，超聲混勻，得到水相；

(c)將得到的有機相和水相，按照5-6:1的體積比混合，超聲混勻，得到提取液。

作為本發明公開可選實施例，提取液可以與液相色譜初始流動相組成相同。

作為本發明公開可選實施例，生物組織非均勻樣本可以是心肌組織、大腦皮層組織或海馬組織。

作為本發明公開可選實施例，生物組織非均勻樣本的處理方法可以包括：

(i)將生物組織用生理鹽水洗凈，擦干，剪碎并混勻；

(ii)稱重，加20％甲醇勻漿，得勻漿液；

(iii)將勻漿液放入-80℃冰箱冷凍；

(iv)將冷凍的勻漿液，按照勻漿液與提取液的體積比4：991，加入提取液；

(v)加入內標氘代苯丙氨酸，渦旋混合，內標氘代苯丙氨酸在最終待測溶液中的體積含量為0.5％；

(vi)12000rpm、4℃離心，取上清液，待測。