[發(fā)明專利]一種固定化漆酶及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710639094.0
• 申請日: 2017-07-31
• 公開（公告）號: CN107338238B
• 公開（公告）日: 2020-09-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馮海燕
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州凱邦生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12N11/14
• 分類號: C12N11/14;C12N11/10;C12N11/084
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11246
• 代理人: 連平

本發(fā)明公開了一種固定化漆酶及其制備方法，包括以下步驟：將液態(tài)漆酶和緩沖液加入到海藻酸鈉溶液中攪拌混合，控制溫度為30?40℃，調(diào)節(jié)pH值為3?7，加入制備的PVA復(fù)合顆粒，超聲分散30?45min，降溫至3?8℃靜置12?24h，過濾后，用水清洗，冷藏保存。本申請的固定化漆酶可以保持較高的活性，并且漆酶可以牢度的固定在載體上，并具有良好的穩(wěn)定性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及酶制劑領(lǐng)域，特別是涉及一種固定化漆酶及其制備方法。

背景技術(shù)

酶的固定化是將酶結(jié)合在固體材料上或限制在一定空間內(nèi)，仍能保持活力和特性，并且可以循環(huán)使用的一類技術(shù)。固定化酶的制備方法主要有四種：包埋法、交聯(lián)法、吸附法以及共價結(jié)合法。包埋法是指將酶分子包埋在多孔高分子材料的三維空間結(jié)構(gòu)中使酶固定化，該方法制備工藝簡單，形成條件溫和并且對酶活性的影響較低，但是載體的孔徑大小會對酶促反應(yīng)中各個物質(zhì)的擴散產(chǎn)生影響。交聯(lián)法是利用交聯(lián)劑與氨基酸殘基反應(yīng)形成共價鍵，使酶分子相互結(jié)合成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，從而達到酶固定化的效果。交聯(lián)法可以使固定化酶的穩(wěn)定性提高，使用壽命延長，但共價交聯(lián)減少了酶的反應(yīng)位點，從而破壞了酶的活性。吸附法是指游離酶通過靜電作用或氫鍵等結(jié)合在載體上而制備固定化酶的方法，該方法具有可逆性、簡易性以及酶活力高等優(yōu)勢，但由于酶與載體的相互作用較弱，易于脫落。共價結(jié)合法是通過共價鍵結(jié)合的方法將酶固定在合適的載體上，酶與載體產(chǎn)生化學(xué)作用，結(jié)合力強，酶泄漏率低，具有較好的穩(wěn)定性和循環(huán)使用性能，但反應(yīng)激烈，容易使酶活力損失。以上四種方法各有優(yōu)缺點，可以采用多種方法混合使用以提高固定化酶的使用品質(zhì)。

漆酶是一種含銅的多酚氧化酶，在自然界中分布于多種植物、真菌、少數(shù)昆蟲和細(xì)菌中，可以分為漆樹漆酶和真菌漆酶兩大類。漆酶能夠催化O-和P-聯(lián)苯酚、多酚、木質(zhì)素、氨基苯酚、多胺、芳基二胺和特定的無機離子的氧化反應(yīng)。漆酶已經(jīng)在多個領(lǐng)域有了廣泛的應(yīng)用，例如紙漿漂白、紡織印染、以及有機污染物處理等。漆酶的活力會受到環(huán)境條件的影響，最適反應(yīng)溫度為25℃到60℃；最適反應(yīng)pH為2.2-2.8，同一種漆酶的作用底物的不同最適pH也有差異；反應(yīng)過程中多種金屬離子也會影響漆酶的活性。將漆酶固定化后其可再用性、易回收性都有了顯著提高，可以有效的延長漆酶的使用壽命，降低使用成本。

中國專利CN201110247183.3公開了一種固定化漆酶，其以磁性介孔碳為載體，漆酶通過物理吸附作用固定于磁性介孔碳上，磁性介孔碳的孔道內(nèi)嵌入有磁性納米顆粒，磁性介孔碳上的漆酶吸附量在140mg/g以上，固定化漆酶的酶活性回收率為60％～95％；該發(fā)明相應(yīng)公開了該固定化漆酶的制備方法，包括以下步驟：先準(zhǔn)備磁性介孔碳和漆酶溶液，漆酶溶液的濃度為0.3～1.0mg/ml，漆酶溶液的pH值為3.0～6.0；然后將磁性介孔碳加入至漆酶溶液中，在25℃～30℃的溫度下對該溶液振蕩3h以上；經(jīng)過后續(xù)處理得到固定化漆酶。該發(fā)明的固定化漆酶基于磁性介孔碳固定漆酶，使得漆酶具有優(yōu)異酶學(xué)性能。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種固定化漆酶及其制備方法，該固定化漆酶可以保持較高的活性，并且漆酶可以牢度的固定在載體上，并具有良好的穩(wěn)定性。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

一種固定化漆酶的制備方法，包括以下步驟：

(1)將硅酸乙酯滴加到鈦酸四丁酯的乙醇溶液中，劇烈攪拌，再滴加冰醋酸和無水乙醇的混合物，形成透明溶膠靜置60-72h，之后烘干后，研磨后在630℃條件下煅燒6h，制得SiO₂/TiO₂復(fù)合材料，將其抽真空后在硝酸銀溶液中浸漬36h，抽濾后，洗滌，干燥，研磨制得載銀SiO₂-TiO₂復(fù)合材料；