[發明專利]一種固定化漆酶及其制備方法

有效

• 申請號: 201710639094.0
• 申請日: 2017-07-31
• 公開（公告）號: CN107338238B
• 公開（公告）日: 2020-09-04
• 發明（設計）人: 馮海燕
• 申請（專利權）人: 蘇州凱邦生物技術有限公司
• 主分類號: C12N11/14
• 分類號: C12N11/14;C12N11/10;C12N11/084
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 連平

1.一種固定化漆酶的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)將硅酸乙酯滴加到鈦酸四丁酯的乙醇溶液中，劇烈攪拌，再滴加冰醋酸和無水乙醇的混合物，形成透明溶膠靜置60-72h，之后烘干后，研磨后在630℃條件下煅燒6h，制得SiO₂/TiO₂復合材料，將其抽真空后在硝酸銀溶液中浸漬36h，抽濾后，洗滌，干燥，研磨制得載銀SiO₂-TiO₂復合材料；其中，SiO₂和TiO₂的質量比為5:2；

(2)將納米Fe₃O₄分散于在卵磷脂的乙醇溶液中，在40-50℃條件下浸泡16-24h，之后離心分離改性納米Fe₃O₄，烘干后，將改性納米Fe₃O₄放入聚乙烯醇的水溶液中，加入步驟(1)制得的載銀SiO₂-TiO₂復合材料，檸檬酸，超聲分散3-4h，加入戊二醛攪拌混合均勻，調節pH為2-3，加熱至60-80℃反應4-6h，之后在室溫下靜置12-18h，用攪拌器打散，制得PVA復合顆粒，水洗后備用；

(3)將液態漆酶和緩沖液加入到海藻酸鈉溶液中攪拌混合，控制溫度為30-40℃，調節pH值為3-7，加入步驟(2)制備的PVA復合顆粒，超聲分散30-45min，降溫至3-8℃靜置12-24h，過濾后，用水清洗，冷藏保存。

2.根據權利要求1所述的固定化漆酶的制備方法，其特征在于：所述步驟(2)中納米Fe₃O₄和卵磷脂的質量比為3:1。

3.根據權利要求1所述的固定化漆酶的制備方法，其特征在于：所述步驟(2)中各組分的使用量為：

聚乙烯醇100份，改性Fe₃O₄10-15份，載銀SiO₂-TiO₂復合材料20-36份，檸檬酸10-22份，戊二醛5-9份。

4.根據權利要求1所述的固定化漆酶的制備方法，其特征在于：所述步驟(3)中海藻酸鈉溶液中的海藻酸鈉的濃度為7-9％；液態漆酶的活性為30U/mL；液態漆酶和海藻酸鈉溶液的使用量體積比1：9。

5.根據權利要求1所述的固定化漆酶的制備方法，其特征在于：所述步驟(3)中的緩沖液為磷酸鹽緩沖液。

6.根據權利要求1所述的固定化漆酶的制備方法，其特征在于：所述步驟(3)中PVA復合顆粒的使用量為15g/L。

7.一種固定化漆酶，其特征在于：由權利要求1-6任一項所述的方法制備而成。