[發明專利]一種高純度血清抗體的制備方法

在審

• 申請號: 201710638548.2
• 申請日: 2017-07-31
• 公開（公告）號: CN109320604A
• 公開（公告）日: 2019-02-12
• 發明（設計）人: 陳燕
• 申請（專利權）人: 天津市正江現代生物技術有限公司
• 主分類號: C07K16/06
• 分類號: C07K16/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/18
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• 代理人: 暫無信息

本發明提供了一種高純度血清抗體的制備方法，其包括，免疫動物的選擇，免疫過程抗體效價的檢測，血液的采集，兩次的離心分離對抗血清的提取，第一次透析純化，第二次陰離子交換層析純化，最后進行脫鹽濃縮，過濾除菌，對病毒的滅活處理，最后通過真空冷凍干燥，獲得血清抗體。本發明提出的血清抗體的提取方法，工藝簡單，成本低，品質好，穩定性好，效價優于其他方法制備的血清抗體。

技術領域

本發明涉及治療類生物制品領域，尤其是一種高純的血清抗體的制備方法。

背景技術

抗體是與相應抗原特異性結合，發揮免疫功能，它是由效應B細胞接受抗原刺激后增殖分化為漿細胞，由漿細胞合成分泌的免疫球蛋白，主要存在于血清等體液中，是介導體液免疫的重要效應分子，目前，提取制備血清抗體最常見的方法鹽析法、冷乙醇法、自然沉析法，有機溶劑沉淀法，但是存在著對血漿中的纖維蛋白去除不徹底，轉化率較低，抗體品質不高的問題。

發明內容

為解決現有技術中存在的技術問題，本發明提供了一種高純度血清抗體的制備方法。

為實現上述目的，本發明是通過以下技術方案實現的：

一種高純度血清抗體的制備方法，包括以下步驟：

(1)選擇適齡、健康、無感染的動物，對動物進行免疫接種，在免疫過程中，動物的營養狀況，以及飼養的衛生狀況必須保持良好；

(2)在末次免疫的7～10天后，對所述動物采集血樣，檢測其抗體效價，抗體滴度達到要求后，選擇上午在動物空腹時用無菌取血器械抽取動物的動脈血液，加入原血量體積10％抗凝劑，攪拌使抗凝劑混合均勻；

(3)將所述血液置于消毒滅菌后的離心管中在4℃下以2000～3000rpm轉速離10～15min，取上清于滅菌袋中，置于-20℃條件下冷凍；

(4)取出冷凍的血清，使用消毒滅菌后的離心管以8000～12000rpm轉速離心10～15min，取上清即為抗血清，置于滅菌袋中；

(5)用無菌針管抽取所述抗血清于無菌雙層反應釜中，加入生理鹽水稀釋，加入穩定劑，再加入1mol/L的鹽酸將溶液pH值調至5.1～5.2，水浴加熱，使反應釜內溶液的溫度保持在65～75℃，反應持續60～80min，過濾后，收集濾液；

(6)取所述濾液，用0.02mol/L的Tris-HCl緩沖溶液于4℃透析，透析袋截留分子量為20000；

(7)取透析過后的組分液，使用陰離子交換層析進一步純化，使用0.2mol/L濃度氯化鈉進行梯度洗脫；

(8)取洗脫過后的組分液，進行脫鹽濃縮，濃縮后的洗脫液采用膜過濾法去除抗血清中的病毒；

(9)采用γ-射線輻照法進行病毒滅活；

(10)分離的抗血清加防腐劑真空冷凍干燥，即得抗體凍干粉。

步驟(1)中所述動物為3～6歲的動物。

步驟(1)中所述動物為牛、馬、羊、鹿中的一種。

步驟(2)中所述抗凝劑為4％的檸檬酸鈉。

步驟(5)中所述生理鹽水與抗血清的體積比為1:2。

步驟(5)中所述穩定劑為軟脂酸鈉。

步驟(5)中所述穩定劑按每100ml抗血清中加入0.7g的量加入。

步驟(5)中所述陰離子交換層析的填料為DEAE—纖維素。

步驟(8)中所述膜的孔徑為0.5um。

本發明的有益效果為：