[發明專利]一種高純度血清抗體的制備方法

在審

• 申請號: 201710638548.2
• 申請日: 2017-07-31
• 公開（公告）號: CN109320604A
• 公開（公告）日: 2019-02-12
• 發明（設計）人: 陳燕
• 申請（專利權）人: 天津市正江現代生物技術有限公司
• 主分類號: C07K16/06
• 分類號: C07K16/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/18
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種高純度血清抗體的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

(1)選擇適齡、健康、無感染的動物，對動物進行免疫接種，在免疫過程中，動物的營養狀況，以及飼養的衛生狀況必須保持良好；

(2)在末次免疫的7～10天后，對所述動物采集血樣，檢測其抗體效價，抗體滴度達到要求后，選擇上午在動物空腹時用無菌取血器械抽取動物的動脈血液，加入原血量體積10％抗凝劑，攪拌使抗凝劑混合均勻；

(3)將所述血液置于消毒滅菌后的離心管中在4℃下以2000～3000rpm轉速離10～15min，取上清于滅菌袋中，置于-20℃條件下冷凍；

(4)取出冷凍的血清，使用消毒滅菌后的離心管以8000～12000rpm轉速離心10～15min，取上清即為抗血清，置于滅菌袋中；

(5)用無菌針管抽取所述抗血清于無菌雙層反應釜中，加入生理鹽水稀釋，加入穩定劑，再加入1mol/L的鹽酸將溶液pH值調至5.1～5.2，水浴加熱，使反應釜內溶液的溫度保持在65～75℃，反應持續60～80min，過濾后，收集濾液；

(6)取所述濾液，用0.02mol/L的Tris-HCl緩沖溶液于4℃透析，透析袋截留分子量為20000；

(7)取透析過后的組分液，使用陰離子交換層析進一步純化，使用0.2mol/L濃度氯化鈉進行梯度洗脫；

(8)取洗脫過后的組分液，進行脫鹽濃縮，濃縮后的洗脫液采用膜過濾法去除抗血清中的病毒；

(9)采用γ-射線輻照法進行病毒滅活；

(10)分離的抗血清加防腐劑真空冷凍干燥，即得抗體凍干粉。

2.一種高純度血清抗體的制備方法，其特征在于：步驟(1)中所述動物為3～6歲的動物。

3.一種高純度血清抗體的制備方法，其特征在于：步驟(1)中所述動物為牛、馬、羊、鹿中的一種。

4.一種高純度血清抗體的制備方法，其特征在于：步驟(2)中所述抗凝劑為4％的檸檬酸鈉。

5.一種高純度血清抗體的制備方法，其特征在于：步驟(5)中所述生理鹽水與抗血清的體積比為1:2。

6.一種高純度血清抗體的制備方法，其特征在于：步驟(5)中所述穩定劑為軟脂酸鈉。

7.一種高純度血清抗體的制備方法，其特征在于：步驟(5)中所述穩定劑按每100ml抗血清中加入0.7g的量加入。

8.一種高純度血清抗體的制備方法，其特征在于：步驟(5)中所述陰離子交換層析的填料為DEAE—纖維素。

9.一種高純度血清抗體的制備方法，其特征在于：步驟(8)中所述膜的孔徑為0.5um。