[發明專利]促進羅漢果CYP87D17基因表達的方法

在審

• 申請號: 201710629512.8
• 申請日: 2017-07-28
• 公開（公告）號: CN107306792A
• 公開（公告）日: 2017-11-03
• 發明（設計）人: 聶天軍;韋榮昌
• 申請（專利權）人: 聶天軍
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01H1/02;A01G1/00;A01G7/04;A01G7/06;A01N45/00;A01N43/08;A01N31/04;A01P21/00
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理事務所(普通合伙)11369
• 代理人: 靳浩

1.一種促進羅漢果CYP87D17基因表達的方法，其特征在于，將羅漢果組培苗接種于誘導培養基中誘導培養至少30天，其中，誘導培養基中茉莉酸甲酯的濃度為50-400μmol/L。

2.如權利要求1所述的促進羅漢果CYP87D17基因表達的方法，其特征在于，所述誘導培養基中還包括基礎培養基，其配方為：MS+1.5mg/L 6-BA+0.3mg/L IBA+3.5g/L瓊脂+30g/l蔗糖+1.0g/L活性炭。

3.如權利要求2所述的促進羅漢果CYP87D17基因表達的方法，其特征在于，所述誘導培養的條件為：相對濕度60-66％、光照強度1400lux、光照時間8h/d、溫度23±2℃。

4.如權利要求2所述的促進羅漢果CYP87D17基因表達的方法，其特征在于，誘導培養基的配制方法如下：將茉莉酸甲酯溶解于體積分數為2％的乙醇水溶液，配制成10000μmol/L的茉莉酸甲酯母液，并用0.22μm的微孔濾膜滅菌，將滅菌后的茉莉酸甲酯母液添加到基礎培養基中，至茉莉酸甲酯濃度為50-400μmol/L，滅菌并冷卻至24-26℃。

5.如權利要求1所述的促進羅漢果CYP87D17基因表達的方法，其特征在于，所述誘導培養基中茉莉酸甲酯的濃度為150-200μmol/L。

6.如權利要求1所述的促進羅漢果CYP87D17基因表達的方法，其特征在于，將經誘導培養的羅漢果組培苗移栽后，待授粉后20-30天，每天早、中、晚于羅漢果表面噴灑誘導液至表面滴水，連續噴灑5天，所述誘導液中含有濃度為50-400μmol/L的茉莉酸甲酯。

7.如權利要求6所述的促進羅漢果CYP87D17基因表達的方法，其特征在于，所述誘導液中含有濃度為100-150μmol/L的茉莉酸甲酯。

8.如權利要求5或6所述的促進羅漢果CYP87D17基因表達的方法，其特征在于，所述誘導培養基中還包括有0.25mg/L油菜素甾醇和0.02mg/L獨角金內酯。

9.如權利要求1所述的促進羅漢果CYP87D17基因表達的方法，其特征在于，所述組培苗經所述誘導培養之前經過根部處理，所述根部處理具體包括：

將組培苗根系中根長小于最長根長度1/4的短根剪除，再將2-3條粗壯根用無菌刀分別劃2-3個傷口，傷口深度小于0.2mm，再用經過預浸泡處理的玉米須包覆組培苗的根系，連續變溫處理10-12次，然后將組培苗上的玉米須去除，置于100-200高斯磁場中磁化處理1h；

每次變溫處理均為將根系包覆有玉米須的組培苗先置于2℃下貯存1min，再置于25℃下貯存5min；

所述預浸泡處理是指將玉米須經洗凈干燥后，于30-40℃水溫的預浸泡溶液浸泡處理15min，所述預浸泡溶液中含有1mg/L的納米氧化鋅、2g/L檸檬酸、3μg/L的天花粉、0.15g/L葡甘露聚糖，以磁化水為溶劑。

10.如權利要求6所述的促進羅漢果CYP87D17基因表達的方法，其特征在于，羅漢果組培苗移栽后，于盛花期早上6-7點摘取雄株2-3級側蔓上的花朵，取花粉，將花粉先置于花粉浸泡液中用頻率為3KHz的超聲波振蕩器中攪拌處理2h，再經400目紗布過濾后，將紗布連同濾上物一起平攤置于帶蓋的玻璃器皿中，蓋上設有通氣孔，將帶蓋玻璃器皿連同花粉一起置于40℃恒溫干燥機中干燥8h，密封儲存于4℃下備用，授粉前將其取出置于相對濕度為85-90％的環境中吸濕24h；

其中，所述花粉浸泡液中含有20g/L的蜂蜜、0.15mg/L油菜素甾醇、0.08mg/L視黃酸、0.02mg/L獨角金內酯，溶劑為磁化水。