[發(fā)明專利]一種免標(biāo)記熒光適配體傳感器及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710626026.0
• 申請日: 2017-07-27
• 公開（公告）號: CN107389919B
• 公開（公告）日: 2020-05-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳清平;張友雄;張菊梅;孫銘;莫樹平;王涓;柏建玲;韋獻(xiàn)虎;蔡芷荷;盧勉飛
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東省微生物研究所（廣東省微生物分析檢測中心）;廣東環(huán)凱微生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533;G01N33/558;G01N33/543
• 代理公司: 廣州科粵專利商標(biāo)代理有限公司 44001
• 代理人: 郝文婷;劉明星

1.一種免標(biāo)記熒光適配體傳感器，其特征在于，包括磁性納米微球、捕獲探針和適配體，所述磁性納米微球表面修飾有所述捕獲探針，所述捕獲探針與所述適配體通過堿基互補(bǔ)配對連接形成雙鏈DNA；所述適配體的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述捕獲探針的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；

所述磁性納米微球的直徑為10～500nm；

所述磁性納米微球?yàn)橛镁酆喜牧匣蚨趸璋难趸F納米粒子的微球，其表面連接有活性基團(tuán)；

所述聚合材料為聚苯乙烯、聚乙烯或聚氯乙烯。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免標(biāo)記熒光適配體傳感器，其特征在于，所述活性基團(tuán)為-COOH、-NH2或-SH。

3.權(quán)利要求1～2中任意一條權(quán)利要求所述免標(biāo)記熒光適配體傳感器的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)將磁性納米微球分散于含有捕獲探針、磷酸鹽緩沖液和偶聯(lián)試劑的混合液中，使所述捕獲探針通過其5’端活性基團(tuán)與所述磁性納米微球表面的活性基團(tuán)通過共價(jià)鍵固定在所述磁性納米微球的表面，得到組裝有捕獲探針的磁性納米微球；

(2)將步驟(1)所得的組裝有捕獲探針的磁性納米微球分散于含有適配體與Tris-HCl緩沖液的混合液中，95℃孵育5～10min，再冷卻至室溫，使所述捕獲探針與所述適配體互補(bǔ)配對連接形成雙鏈DNA，得到免標(biāo)記熒光適配體傳感器。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述免標(biāo)記熒光適配體傳感器的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，所述偶聯(lián)試劑為乙基-N，N-二甲基丙基碳二亞胺、N-羥基丁二酰亞胺和4-(N-馬來酰亞胺甲基)環(huán)己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亞胺酯鈉鹽。

5.權(quán)利要求1～2中任意一條權(quán)利要求所述免標(biāo)記熒光適配體傳感器在蝦致敏蛋白的檢測中的應(yīng)用。

6.一種快速檢測蝦致敏蛋白的方法，其特征在于，所述檢測方法包括如下步驟：

(1)將免標(biāo)記熒光適配體傳感器與待測物在37℃下孵育，如待測蛋白中含有蝦致敏蛋白，則適配體從雙鏈DNA中脫離，并與待測物中的蝦致敏蛋白形成復(fù)合物；

(2)磁分離，除去未形成復(fù)合物的免標(biāo)記熒光適配體傳感器；

(3)在步驟(1)所得復(fù)合物中加入熒光探針，根據(jù)產(chǎn)生的熒光信號定量分析，得到待測物中蝦致敏蛋白的含量。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的快速檢測蝦致敏蛋白的方法，其特征在于，所述熒光探針為OliGreen。