[發(fā)明專利]一種免標(biāo)記熒光適配體傳感器及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710626026.0
• 申請(qǐng)日: 2017-07-27
• 公開（公告）號(hào): CN107389919B
• 公開（公告）日: 2020-05-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳清平;張友雄;張菊梅;孫銘;莫樹平;王涓;柏建玲;韋獻(xiàn)虎;蔡芷荷;盧勉飛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣東省微生物研究所（廣東省微生物分析檢測中心）;廣東環(huán)凱微生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/533
• 分類號(hào): G01N33/533;G01N33/558;G01N33/543
• 代理公司: 廣州科粵專利商標(biāo)代理有限公司 44001
• 代理人: 郝文婷;劉明星

本發(fā)明公開了一種免標(biāo)記熒光適配體傳感器及其制備方法和在快速檢測蝦致敏蛋白中的應(yīng)用。本發(fā)明免標(biāo)記熒光適配體傳感器包括磁性納米微球、捕獲探針和適配體，磁性納米微球表面修飾有捕獲探針，捕獲探針與適配體通過堿基互補(bǔ)配對(duì)連接形成雙鏈DNA；適配體的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，捕獲探針的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。本發(fā)明免標(biāo)記熒光適配體傳感器用于蝦致敏蛋白的快速檢測，具有抗干擾能力強(qiáng)、檢測準(zhǔn)確度高、穩(wěn)定性好、重復(fù)性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，具有良好的應(yīng)用前景和市場價(jià)值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及蛋白分析檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種利用適配體識(shí)別技術(shù)和免標(biāo)記熒光探針制得的免標(biāo)記熒光適配體傳感器及其在蝦致敏蛋白的快速檢測中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

隨著人們生活水平的日漸提高，食物過敏現(xiàn)已逐漸成為一個(gè)公眾廣泛關(guān)注的食品安全問題。然而，對(duì)于食物過敏還沒有有效的醫(yī)學(xué)治療方法，最有效的手段是嚴(yán)格避免接觸食物過敏原。因此，全面認(rèn)識(shí)食物過敏發(fā)生機(jī)制和開發(fā)不同過敏原的檢測分析方法顯得尤為必要。

蝦及其制品味道鮮美，營養(yǎng)豐富，作為一種重要的海鮮產(chǎn)品，越來越受到消費(fèi)者的喜愛。但蝦原肌球蛋白是世界上公認(rèn)的八大食物致敏原之一，具有高致敏性，約20％的過敏病人對(duì)蝦過敏，小兒發(fā)病率高達(dá)60％，嚴(yán)重影響了患者的生活質(zhì)量。所以，急需研究出快速檢測蝦致敏蛋白的方法，以達(dá)到預(yù)防的目的。目前，有關(guān)蝦原肌球蛋白的檢測方法主要包括基于抗體的酶聯(lián)免疫法、色譜法、質(zhì)譜法等，這些檢測手段都比較繁瑣，需要昂貴的設(shè)備和專業(yè)人才。因此，如何構(gòu)建快速簡便、靈敏有效的蝦致敏蛋白檢測方法引起了業(yè)內(nèi)的廣泛關(guān)注。

核酸適配體是一類在體外通過指數(shù)富集配體系統(tǒng)進(jìn)化技術(shù)(Systematicevolution of ligands by exponential enrichment，SELEX)篩選得到的寡核苷酸，能夠特異性地識(shí)別小分子、毒素、蛋白質(zhì)、細(xì)胞甚至致病菌等，具有穩(wěn)定性好、易合成與標(biāo)記、分子量小及毒性低等優(yōu)點(diǎn)，在臨床診斷與治療和食品安全監(jiān)測與控制等領(lǐng)域均顯示了廣闊的應(yīng)用前景。由于其操作簡單、穩(wěn)定性好、靈敏度高、成本低等優(yōu)點(diǎn)，基于核酸適配體的熒光生物傳感器已成為代替?zhèn)鹘y(tǒng)檢測方法的潛在選擇。近年來，一系列用于蛋白質(zhì)檢測的熒光適配體傳感器已有比較多的報(bào)道。但這些已有的方法都需要利用一些先進(jìn)的納米材料作為熒光基團(tuán)或淬滅基團(tuán)來標(biāo)記核酸適配體，這樣的標(biāo)記工作不僅增加了成本而且降低了核酸適配體對(duì)目標(biāo)物質(zhì)的親和力。另外，這些基于納米材料及生化反應(yīng)的信號(hào)增強(qiáng)策略容易導(dǎo)致重復(fù)性低、操作流程復(fù)雜等缺點(diǎn)。由于磁性納米微球功能化的靈活性及簡單性，適配體結(jié)合到磁性納米微球表面構(gòu)建傳感探針引起了廣泛的關(guān)注。磁分離操作簡單，而且能夠有效的減少或消除復(fù)雜基質(zhì)的干擾，因此磁性納米微球是極具吸引力的構(gòu)建生物傳感器的選擇。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于：克服現(xiàn)有蝦致敏蛋白快速檢測中存在的不足，提供一種經(jīng)濟(jì)、簡便、準(zhǔn)確、靈敏度高且可實(shí)現(xiàn)定量檢測蝦致敏蛋白的免標(biāo)記熒光適配體傳感器及其制備方法。

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明上述目的，本發(fā)明提供了一種免標(biāo)記熒光適配體傳感器，其包括磁性納米微球、捕獲探針和適配體，所述磁性納米微球表面修飾有所述捕獲探針，所述捕獲探針與所述適配體通過堿基互補(bǔ)配對(duì)連接形成雙鏈DNA；所述適配體的核苷酸序列如SEQID NO:1所示，所述捕獲探針的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

作為本發(fā)明免標(biāo)記熒光適配體傳感器的一種優(yōu)選技術(shù)方案，所述磁性納米微球的直徑為10～500nm。

作為本發(fā)明免標(biāo)記熒光適配體傳感器的一種優(yōu)選技術(shù)方案，所述磁性納米微球?yàn)橛镁酆喜牧匣蚨趸璋难趸F納米粒子的微球，其表面連接有活性基團(tuán)。

作為本發(fā)明免標(biāo)記熒光適配體傳感器的一種優(yōu)選技術(shù)方案，所述聚合材料為聚苯乙烯、聚乙烯或聚氯乙烯。

作為本發(fā)明免標(biāo)記熒光適配體傳感器的一種優(yōu)選技術(shù)方案，所述活性基團(tuán)為-COOH、-NH₂或-SH。