[發明專利]一種快速分析壯陽保健品中非法添加西地那非類似物的方法

有效

• 申請號: 201710619260.0
• 申請日: 2017-07-26
• 公開（公告）號: CN107505305B
• 公開（公告）日: 2020-09-04
• 發明（設計）人: 陸峰;呂狄亞;曹巖;柴逸峰;朱臻宇;李丹;柳燕;陳秀娟
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第二軍醫大學
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65;G01N30/90
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 趙青

1.一種篩選西地那非衍生物快速檢測條件的方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟一：以西地那非的中間體3-(6,7-二氫-1-甲基-7-氧代-3-丙基-1H-吡唑[4,3-d]嘧啶-5-yl)-4-乙氧基-苯磺酰為關鍵中間體，基于構效關系設計西地那非衍生物目標分子；

步驟二：配體與PDE-5復合物晶體結構進行虛擬對接

采用藥物設計對接平臺Discovery Studio 3.0進行步驟一目標分子與PDE-5復合物晶體結構活性腔對接，選擇Libdock分子對接技術，根據對接后打分函數，選擇評分高的西地那非衍生物；

步驟三：密度泛函方法預測西地那非衍生物的理論拉曼圖譜

采用GAUSS VIEW 5.0對分子構型進行優化后，選擇B3LYP水平的DFT方法，對體系中氫原子加p極化函數和重原子加d的極化函數的6-31G^*(d,p)基組，對步驟二選擇的西地那非衍生物進行構型優化后，在Linux系統中，由GAUSSIAN 09軟件計算；

步驟四：西地那非衍生物理論共有峰

根據DFT計算結果，采用GAUSSVIEW 5.0軟件對計算得到的西地那非衍生物理論拉曼譜圖進行理論共有峰歸納；

步驟五：西地那非衍生物的合成及結構驗證

合成步驟二選擇的西地那非衍生物，經核磁、質譜驗證結構；

步驟六：西地那非衍生物結合動力學測定

采用Biacore T200分子相互作用分析系統，依次進樣不同濃度的化合物，實驗數據采用Biacore T200 evaluation軟件分析，采用動力學結合模型擬合計算實驗結果；

步驟七：建立西地那非衍生物的TLC-SERS檢測條件

稱取步驟五制得的西地那非衍生物進行薄層分離，展開體系為二氯甲烷:丙酮:氨水體積比為20:1.5:0.2；

滴加表面增強劑，表面增強劑為金溶膠、有機銀溶膠、銀溶膠或金銀合膠，采用便攜式拉曼光譜儀進行掃描；

步驟八：非空白譜圖進行處理

采用標準譜圖處理軟件對非空白譜圖進行處理，選取400-1700cm^-1波段作為特征波段，對所述特征波段采用OPUS 5.0軟件對譜圖進行平滑及基線校正，再對校正后的光譜數據進行矢量歸一化處理，得到預處理表面增強拉曼光譜圖；

步驟九：對預處理表面增強拉曼光譜圖進行判別

TLC-SERS檢測得到共有峰與步驟四DFT理論計算得到的共有峰進行整合和歸納，確定西地那非衍生物的共有吸收峰和判定待測樣品中含有西地那非衍生物的標準；

步驟十：UPLC-QTOF/MS驗證

為現場檢測的結果進行進一步確證，避免“假陽性”情況的發生；建立UPLC-TOF/MS檢測方法；對新型未知西地那非衍生物的結構進行確證；并分析西地那非衍生物碎片的裂解規律，總結那非類衍生物共有碎片離子，無標準品情況下，根據那非類衍生物共有碎片離子進行判定。