[發明專利]一種用于檢測芝麻過敏原2Salbumin基因的LAMP引物組合物及其試劑盒

在審

• 申請號: 201710616118.0
• 申請日: 2017-07-26
• 公開（公告）號: CN107299142A
• 公開（公告）日: 2017-10-27
• 發明（設計）人: 袁旦;陳沁;方雪恩;孔繼烈
• 申請（專利權）人: 上海速創診斷產品有限公司;復旦大學;上海大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 上海申新律師事務所31272
• 代理人: 竺路玲

技術領域

本發明涉及基因檢測技術領域，尤其涉及一種用于檢測芝麻過敏原2Salbumin基因的LAMP引物組合物、檢測試劑盒及檢測方法。

背景技術

食物過敏是機體免疫系統對某些食物產生的異常免疫反應，相應的免疫球蛋白會和這些食物結合，釋放出很多化學物質，引起過敏癥狀(如惡心、嘔吐、濕疹等)，嚴重者會導致過敏性休克發生。據報道，芝麻是重要的食物過敏原。芝麻中含有多種過敏蛋白，比較重要的是：缺少硫元素的2S白蛋白(Ses i 1)，富含硫元素的2S白蛋白(Ses i 2)，7S球蛋白(Ses i 3)，兩種油質蛋白(Ses i 4和Ses i 5)以及兩種11S球蛋白(Ses i 6和Ses i 7)等。它們中最主要的致敏成分是2S白蛋白。日本、美國和歐盟等都要求在相應的商品上標明是否含有芝麻，以避免過敏患者誤食而引起癥狀。因此對于商品是否含有芝麻過敏原的抽檢，找到一種快速、簡單的檢測方法顯得尤為重要。

不言而喻，對檢測食品中是否含有芝麻過敏原具有十分重要的意義。目前，檢測芝麻過敏原主要有以下兩種檢測方法：

1)檢測芝麻過敏原蛋白成分，如酶聯免疫吸附法(ELISA)、高效液相色譜法(HPLC)質譜法(MALDI—TOF/MS)、Western blotting檢測等方法。

2)檢測過敏原基因殘留，如PCR檢測技術，焦磷酸測序技術等，其中PCR檢測方法是最主要、最準確的方法，但這類方法操作過程比較復雜，需要專業人員；所使用的儀器比較昂貴，檢測也很耗時。另外電泳常用的EB染料為強致癌物質，有較強毒性，且難以實行現場檢測。

綜上所述，找到一種快速、簡單、安全的檢測芝麻過敏原的檢測方法顯得極為必要。

環介導等溫基因擴增技術(Loop-Mediated Isothermal Amplification，以下簡稱LAMP法)是由Notomi等建立的一種快速高效、特異性強的核酸等溫擴增技術，其具有快速簡單、操作方便、靈敏度高、容易普及、安全可靠等優點，目前該技術尚未使用于檢測芝麻過敏原。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術中的缺陷，提供一種用于檢測芝麻過敏原2S albumin基因的LAMP引物組合物，并提供一種含有上述LAMP引物組合物的檢測試劑盒及使用該LAMP引物組合物的檢測方法，本發明所述的檢測方法具有特異性強、響應速度快、靈敏度高、結果判定簡單、操作簡便、價格低廉、應用范圍廣等特點。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

本發明的第一個目的是提供一種用于檢測芝麻過敏原2S albumin基因的LAMP引物組合物，其包括兩條外引物(F3、B3)和兩條內引(FIP、BIP)，這4條引物的核苷酸序列如下所示：

正向外引物F3(SEQ ID No：1)：GGAACGTGGACGAGAGGT；

反向外引物B3(SEQ ID No：2)：CGCTTGGTTGATTGCGATTC；

正向內引物FIP(SEQ ID No：3)：

GATTGGCCCTCCTGGTAGCCGCTGTGAGGCCATTAGGC；

反向內引物BIP(SEQ ID No：4)：

ACAGCAGGTTTACCAGAGGGCATTGGCATTGCTGGGGTC。

本發明的第二個目的是提供一種含有上述LAMP引物組合物的用于檢測芝麻過敏原2S albumin基因的試劑盒。

為了進一步優化上述試劑盒，本發明所采取的技術措施還包括：

優選地，該試劑盒還包括LAMP工作液、熒光指示劑和Bst DNA聚合酶。

優選地，所述LAMP工作液包括Tris-HCl、KCl、(NH₄)₂SO₄、MgSO₄和Tween-20。

優選地，所述熒光指示劑選自SYBR Green、Ever Green、Pico Green、SYTO系列中的至少一種；更優選為SYBR Green，更具體的說為SYBR greenⅠ。

優選地，該試劑盒還包括顯色劑。

優選地，所述顯色劑選自HNB、Calcein、甲酚紅、酚紅、間甲酚紫、溴甲酚紫、中性紅、萘酚酞和百里酚藍；更優選為中性紅(NeuRed染料)。

優選地，該試劑盒還包括陽性對照和陰性對照，所述陽性對照為含有芝麻過敏原基因的樣品稀釋液，所述陰性對照為不含芝麻過敏原基因的去離子水。